饲料中淀粉的测定(蒽酮比色法).docx

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1、化验室检测标准饲料中淀粉的测定（蒽酮比色法）———————————————————————————————————————一、原理用乙醇溶液去除饲料样品中的可溶性糖，再用高氯酸溶液溶解残留物中的淀粉，使淀粉与其他成分分离，在浓硫酸的作用下，蒽酮与淀粉反应生成蓝绿色的化合物，用分光光度计测定在640nm下的吸光度.二、试剂配制1.80％乙醇溶液；2.52％高氯酸溶液；3.蒽酮试剂(将0.4g蒽酮溶于100mL浓硫酸溶液中，现用现配)；4.淀粉标准液(将200mg淀粉倒入100mL烧杯中，加入5mL蒸馏水，加入65mL52％高氯酸溶液，搅拌全部溶解，转入100mL溶量瓶中，加水定容，浓度2mg／

2、mL；取上述标准淀粉溶液10.00mL于250mL溶量瓶中，加水定容，此淀粉溶液的浓度为80ug／mL.)三．标准曲线在洁净的试管，分别加入0.0、10.0、20.0、40.0、60.0、80.0ug淀粉标准液，每一个浓度2个重复，加水调整各试管溶液均为2.00mL，在冰水中冷却2min，加入6.00mL蒽酮－硫酸溶液，摇匀，在冰水中冷却2min.将试管放入沸水中5min，各试管显色呈蓝绿色，取出试管，冷却至室温.用2.00mL蒸馏按照上述操作作为空白参比，于640nm波长下比色，测定各试管溶液的吸光度.以吸光度为横坐标，淀粉浓度作为纵坐标，绘制工作曲线，进行曲线拟合，得到吸光度和淀粉浓度之

3、间的回归公式。四．操作步骤1.称取1-2g饲料样品于80mL离心管中，可溶性淀粉称取0.5g其中包括2个重复，加入80％乙醇溶液2滴使样品湿润。2.再加入5mL水摇匀，加入25mL热的80％乙醇溶液,摇匀后放置5min,以2500/分钟速度离心5min，倾出上清液。3.再用30mL80％乙醇溶液提取1次。4.于上述残留物中加入5mL水和30mL52％高氯酸溶液，搅拌10min，以2500转/分钟离心10min。5.将上清液转入100mL溶量瓶中，残留物再用35mL52％高氯酸溶液提取，合并提取液，以水定容。6.过滤，弃去最初5mL滤液，吸取4.00mL滤液于100mL溶量瓶中，加水定容.取上

4、述淀粉提取液2.00mL，测定沸水浴显色后溶液的吸光度.五．计算公式淀粉(％)＝G/(8M).式中：G为由饲料样品提取液测定的吸光度，由工作曲线回归公式计算出来的淀粉毫克数；M为饲料样品的质量；最后换算成每克饲料干物质中淀粉的含量。对于淀粉含量高，而且粗纤维含量低的谷物籽实饲料，推荐使用高氯酸水解－蒽酮比色法，其测定结果差较小，而作步骤快捷简便；对于粗纤维含量高的粗饲料，建议用酶水解法测定，但由于操作步骤繁琐，应尽量减少操作本身造成的实验误差，而且应该选用纯度高、活性强的酶制剂。