实验二十一 可溶性总糖测定(蒽酮比色法)

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1、实验二十一可溶性总糖的测定（蒽酮比色法）一、目的掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。二、原理强酸可使糖类脱水生成糠醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620nm处有最大吸收.在10-100ug范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30ug左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。三、仪器、试剂和材料1.仪器（1)分光光度计(2）电子顶载天平(3）三角瓶：50m1X1（4）大试管：9支（5)试管架，试管夹（6）漏斗，漏斗架（7）容量瓶：50rnlX2（8）刻度吸管：1m1

2、X3，2m1X1，5mlX1（9）水浴锅2.试剂（1)葡萄糖标准液：l00ug/ml(2）浓硫酸(3)蒽酮试剂:0.2g蒽酮溶于100ml浓H2SO4中当日配制使用。3.材料小麦分蘖节。四、操作步骤1.葡萄糖标准曲线的制作取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：管号1234567葡萄糖标准液（ml）00.10.20.30.40.60.8蒸馏水（ml）10.90.80.70.60.40.2葡萄糖含量（ug）0102030406080在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0

3、min取出，用流水冷却，室温放置10min，在620nm波长下比色。以标准葡萄糖含量（ug)作横坐标，以吸光值作纵坐标，作出标准曲线。2.植物样品中可溶性糖的提取将小麦分蘖节剪碎至2mm以下，准确称取Ig,放入50m1三角瓶中，加沸水25m1，在水浴中加盖煮沸10min，冷却后过滤，滤液收集在50m1容量瓶中，定容至刻度。吸取提取液2m1，置另一50m1容量瓶中，以蒸馏水稀释定容，摇匀测定。3.测定吸取lml已稀释的提取液于大试管中，加入4.Oml蒽酮试剂，以下操作同标准曲线制作。比色波长620nm，记录吸光度，在标准曲线上查出葡萄糖的含量（ug）。查表所得糖含量（ug）×稀释倍数五、结果

4、处理六、注意事项1.该显色反应非常灵敏，溶液中切勿混入纸屑及尘埃。2.H2SO4要用高纯度的。3.不同糖类与蒽酮的显色有差异，稳定性也不同。加热、比色时间应严格掌握。七、思考题1.用水提取的糖类有哪些？2.制作标准曲线时应注意哪些问题？