2015版中国药典微生物检验.ppt

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1、2015版中国药典微生物检验2015版微生物检验实现了三部药典标准的统一形成了一个比较完备的药品微生物检验标准体系，具有以下两个显著特征①全面与国际标准接轨；②推动了药品微生物控制由终产品检验向过程控制转变。2015版微生物检验微生物基础知识非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法(通则1105)解析非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法(通则1106)解析非无菌药品微生物限度标准(通则1107)解析培养基的质量管理工艺用水的检查无菌检查法(通则1101)解析微生物基本知识定义：微生物（microorganism）是对所有形体微小，单细胞或结构较为简单的多细胞甚至无细胞结构的低等生物的统称。微

2、生物的分类原核微生物：细菌、放线菌、立克次氏体支原体、衣原体、蓝细菌和古细菌真核微生物：酵母菌、霉菌、粘菌、原生动物和藻类非细胞型生物：病毒、噬菌体、类病毒、拟病毒和朊病毒微生物特点体积小，比表面积大吸收多，转化快生长旺，繁殖快适应强，易变异种类多，分布广球菌杆菌杆菌螺旋菌革兰氏阳性细菌与阴性细菌细胞壁构造图菌落菌落(colony)：将单一微生物细胞或一小堆同种微生物细胞接种到固体培养基表面，当它占有一定空间并给予适宜的培养条件，该细胞就会迅速生长繁殖。结果形成以母细胞为中心，肉眼可见并有一定形态构造的子细胞集团。真核微生物形态真核微生物：是细胞核具有核膜、核仁，能进行有丝分裂，细胞质中存在

3、线粒体或同时存在叶绿体等多种细胞器的一类微生物。酵母菌特性①个体一般以单细胞状态存在②多数为出芽繁殖，也有裂殖；③能发酵糖类产能；④细胞壁常含甘露聚糖；⑤喜在含糖量较高、偏酸性环境生长。酵母菌菌落特征与细菌相似，较细菌大而厚，圆形，光滑湿润，粘性，易用针挑起，颜色单调，多为乳白色、少数红色、常有酒香味霉菌特性丝状真菌的一个通俗名称，意即“发霉的真菌”。霉菌的营养体由菌丝构成，菌丝无限生长并产生分枝，分枝的菌丝相互交错在一起，形成菌丝体。霉菌菌落特征霉菌细胞呈丝状，在固体培养基上形成营养菌丝和气生菌丝。霉菌菌落较酵母菌大质地疏松，外观干燥，不透明，呈现或蛛网状、绒毛状或棉絮状。菌落与培养基连接

4、紧密，不易挑取，常有霉味。非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法(通则1105)解析格式变化内容变化通用要求变化—适用范围—检测环境变化—培养基—计数的方法—菌种及菌液制备—培养基适用性检查—计数方法适用性试验—供试品检查格式变化2010版附录ⅩⅢC/附录XIJ：微生物限度检查法2015版非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法（通则1105）非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法（通则1106）非无菌药品微生物限度标准（通则1107）中国药典2010年版微生物计数法编排方式中国药典2015年版微生物计数法编排方式格式变化内容变化适用范围微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计

5、数。明确规定本法不适用于活菌制剂的检查。增加了检测产品的范围。2010版：系检查非规定灭菌制剂及其原料辅料受微生物污染程度的方法检测环境变化微生物计数试验环境要求微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防治污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流区域、工作台面及环境应定期进行监测。9203：药品微生物实验室质量管理指导原则“微生物限度检查应在不低于D级背景下的B级单向流空气区域内进行”。试剂和试药中和剂、灭活剂和表面活性剂均应对微生物无毒性其相互间具有相容性，有利于样品中微生物均匀分散。稀释液1、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液；2、

6、pH6.8无菌磷酸盐缓冲液、pH7.2无菌磷酸盐缓冲液、pH7.6无菌磷酸盐缓冲液；如需要，可在上述稀释液灭菌前或灭菌后加入表面活性剂或中和剂等。3、0.9%无菌氯化钠溶液。培养基对照培养基按标准物质管理，由中检院负责研制分发。计数用培养基a.需氧菌总数：胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）b.霉菌和酵母菌总数：沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）玫瑰红钠琼脂培养基或含抗生素的SDA。计数的方法1.平皿法：包括倾注法和涂布法。该项下明确可使用直径较大平皿，且培养基的用量应相应增加。2.薄膜过滤法。3.最可能数法(Most-Probable-NumberMethod，简称MPN。MPN法用于微生物计数时精

7、确度较差，但对于某些微生物污染量很小的供试品，MPN法可能是更适合的方法。注：方法选择原则：根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择。培养基适用性检查胰酪大豆胨琼脂：金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉胰酪大豆胨肉汤：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌沙氏葡萄糖琼脂、玫瑰红钠琼脂、白色念珠菌、黑曲霉。计数方法适用性试验1.术语变化：计数方法适用性试验2.需氧菌总数测定用五