尼氏染色步骤.doc

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1、小鼠脑冰冻切片后，想做尼氏染色，用焦油紫，具体步骤是什么？焦油紫的溶液该如何配制？焦油紫染液的配制：焦油紫/0.1g蒸馏水/99ml1%冰醋酸1ml冰冻切片氯仿中1分钟；无水酒精中1分钟；95%酒精、70%酒精各1分钟，蒸馏水洗片刻；进入焦油紫染液染色30分钟（37度温箱中染色10分钟），蒸馏水洗涤；95%酒精分色；常规脱水、透明、封片。尼氏体呈紫色，细胞核呈淡紫色，胶质细胞呈淡紫色。研究脊椎动物中枢神经系统的细胞构筑学,最常用的方法是神经细胞染色,也称尼氏染色.虽然碱性染料都可用于中枢神经系统染色,但常用的有以下几种:焦油紫,甲苯胺蓝、硫堇.甲苯胺蓝属于人工合成的醌亚胺类碱性染料，有两个发色

2、团，一个是亚胺基(-N=),另一个是醌基，同类的有硫堇、亚甲兰，次甲基紫、中性红、焦油紫等；因为是碱性燃料，多作为细胞核染色剂－－细胞核中的核酸含有酸性物质对碱性燃料有亲和力，称之为“嗜碱性”。硫堇染液(工作液)①干液(硫堇)：硫堇1g或2g溶于100mL50%乙醇中，溶解后过滤备用；②醋酸钠缓冲液：醋酸钠·3H2O9.7g，巴比妥钠14.7g，溶于500mL蒸馏水中；③0.1mol／L盐酸；按①：②：③=40：28：32比例配成混合液，调pH5.7±0.2，即得硫堇工作液。尼氏体又称虎斑,是神经细胞的一种特殊结构,具有嗜碱性的特点易被碱性染料,如焦油紫,甲苯胺蓝、硫堇等着染.受染后呈块状(形

3、如虎斑)或粒状.尼氏体分布在神经细胞除轴突之外的细胞质中,核周围颗粒较大,近边缘处较小而细长.尼氏体还可因生理状态的改变而变化,如在生理情况下,尼氏体大而数量多,反映出神经细胞旺盛的功能状态;在神经元受损伤时尼氏体的数量可减少甚至消失.因此取材时应尽量获取新鲜材料才能制作出满意的标本.mickeyzqwrote:焦油紫染液的配制：焦油紫/0.1g蒸馏水/99ml1%冰醋酸1ml冰冻切片氯仿中1分钟；无水酒精中1分钟；95%酒精、70%酒精各1分钟，蒸馏水洗片刻；进入焦油紫染液染色30分钟（37度温箱中染色10分钟），蒸馏水洗涤；95%酒精分色；常规脱水、透明、封片。尼氏体呈紫色，细胞核呈淡紫色

4、，胶质细胞呈淡紫色。你的没有经过复染，对比也可以这么鲜明啊我用的是1％的甲苯胺蓝，具体步骤是：常规石蜡切片，二甲苯透明，酒精梯度复水，入1％甲苯胺蓝室温下染3min，自来水冲洗，95％酒精分化，0.5％伊红复染1s，水洗，透明封片，但是结果不好，伊红复染后颜色很深，原来的蓝色被覆盖的很严重，不知道该怎么改进换焦油紫看看,焦油紫着色比较深.（二）神经细胞尼氏体染色正常的神经细胞都含有一定数量的尼氏化，它们主要分布于神经细胞的浆中，形状有大有小，如三角形，有的为椭圆形。这些物质能被大部分的蓝色染料所染色，这些染料如焦油坚牢紫（Cresylfastviolet）亚甲蓝（methyleneblue）甲

5、苯胺蓝（toluidineblue）硫董（thionin）等钭其染为蓝色。但是，当神经细胞受伤后，胞质内的尼氏体更可发生变化，严重的可消失。焦油坚牢紫显示尼氏体焦油坚牢紫1g蒸馏水100ml*作方法：1、切片脱蜡至水2、用焦油坚牢紫水溶液浸染20-30分钟3、水洗4、用95%酒精分化5、无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶结果：神经细胞单位：紫-蓝色细胞核：紫-蓝色尼氏体：紫-深蓝色注意：1、应用酒精分化切片，要迅速，防止过度分化，将切片上的颜色全部脱掉。神经纤维染色使用说明：1.样品处理a)对于石蜡切片：二甲苯中脱蜡5-10分钟，共三次。注：脱蜡不充分会导致染色不均匀。无水乙醇5分钟。90%乙

6、醇2分钟。70%乙醇2分钟。蒸馏水2分钟2.尼氏(Nissl)染色对于上述处理好的样品：尼氏(Nissl)染色液染色染色3-10分钟(可以根据染色结果和要求调整时间，染色时温度提高到37-50℃对于25-50微米等较厚的切片可以使染色更均匀）。蒸馏水洗涤2次(每次数秒钟即可)。95%乙醇约5秒。此时，如果需要直接观察，可以用70%乙醇洗涤2次。如需脱水、透明后封片按后续步骤进行，70%乙醇洗涤后仍可按照后续步骤进行脱水、透明和封片处理。注：如果用于免疫组化等染色后的复染，可以参考上述步骤在其它染色完成后直接进行尼氏(Nissl)染色。3.脱水、透明、封片或进行其它染色a)脱水、透明、封片：95

7、%乙醇脱水2分钟。换用新鲜的95%乙醇再脱水2分钟。二甲苯透明5分钟。换用新鲜的二甲苯，再透明5分钟。用中性树胶或其它封片剂封片。显微镜下观察，细胞呈现斑驳的蓝紫色染色。b)进行其它染色：如果进行免疫荧光染色，或进行Hoechst等荧光染料的染色，在Nissl染色液染色后：70％乙醇洗涤2次，每次2分钟。PBS或生理盐水或TBS或TBST等用于免疫染色或荧光染料染色的溶液浸泡5分钟。然后就可以进行