尼氏染色步骤

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1、小鼠脑冰冻切片后，想做尼氏染色，用焦油紫，具体步骤是什么？焦油紫的溶液该如何配制？焦油紫染液的配制：焦油紫/0.1g蒸馏水/99ml1%冰醋酸1ml冰冻切片氯仿中1分钟；无水酒精中1分钟；95%酒精、70%酒精各1分钟，蒸馏水洗片刻；进入焦油紫染液染色30分钟（37度温箱中染色10分钟），蒸馏水洗涤；95%酒精分色；常规脱水、透明、封片。尼氏体呈紫色，细胞核呈淡紫色，胶质细胞呈淡紫色。mickeyzqwrote:焦油紫染液的配制：焦油紫/0.1g蒸馏水/99ml1%冰醋酸1ml冰冻切片氯仿中1分钟；无水酒精中1分钟；95%酒精、70%酒精各1分钟，蒸馏水洗片刻；进入焦油紫染液染色30分钟（3

2、7度温箱中染色10分钟），蒸馏水洗涤；95%酒精分色；常规脱水、透明、封片。尼氏体呈紫色，细胞核呈淡紫色，胶质细胞呈淡紫色。你的没有经过复染，对比也可以这么鲜明啊我用的是1％的甲苯胺蓝，具体步骤是：常规石蜡切片，二甲苯透明，酒精梯度复水，入1％甲苯胺蓝室温下染3min，自来水冲洗，95％酒精分化，0.5％伊红复染1s，水洗，透明封片，但是结果不好，伊红复染后颜色很深，原来的蓝色被覆盖的很严重，不知道该怎么改进换焦油紫看看,焦油紫着色比较深.（二）神经细胞尼氏体染色正常的神经细胞都含有一定数量的尼氏化，它们主要分布于神经细胞的浆中，形状有大有小，如三角形，有的为椭圆形。这些物质能被大部分的蓝色

3、染料所染色，这些染料如焦油坚牢紫（Cresylfastviolet）亚甲蓝（methyleneblue）甲苯胺蓝（toluidineblue）硫董（thionin）等钭其染为蓝色。但是，当神经细胞受伤后，胞质内的尼氏体更可发生变化，严重的可消失。焦油坚牢紫显示尼氏体焦油坚牢紫1g蒸馏水100ml作方法：1、切片脱蜡至水2、用焦油坚牢紫水溶液浸染20-30分钟3、水洗4、用95%酒精分化5、无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶结果：神经细胞单位：紫-蓝色细胞核：紫-蓝色尼氏体：紫-深蓝色注意：1、应用酒精分化切片，要迅速，防止过度分化，将切片上的颜色全部脱掉。神经纤维染色使用说明：1.样品处理a

4、)对于石蜡切片：二甲苯中脱蜡5-10分钟，共三次。注：脱蜡不充分会导致染色不均匀。无水乙醇5分钟。90%乙醇2分钟。70%乙醇2分钟。蒸馏水2分钟2.尼氏(Nissl)染色对于上述处理好的样品：尼氏(Nissl)染色液染色染色3-10分钟(可以根据染色结果和要求调整时间，染色时温度提高到37-50℃对于25-50微米等较厚的切片可以使染色更均匀）。蒸馏水洗涤2次(每次数秒钟即可)。95%乙醇约5秒。此时，如果需要直接观察，可以用70%乙醇洗涤2次。如需脱水、透明后封片按后续步骤进行，70%乙醇洗涤后仍可按照后续步骤进行脱水、透明和封片处理。注：如果用于免疫组化等染色后的复染，可以参考上述步骤

5、在其它染色完成后直接进行尼氏(Nissl)染色。3.脱水、透明、封片或进行其它染色a)脱水、透明、封片：95%乙醇脱水2分钟。换用新鲜的95%乙醇再脱水2分钟。二甲苯透明5分钟。换用新鲜的二甲苯，再透明5分钟。用中性树胶或其它封片剂封片。显微镜下观察，细胞呈现斑驳的蓝紫色染色。b)进行其它染色：如果进行免疫荧光染色，或进行Hoechst等荧光染料的染色，在Nissl染色液染色后：70％乙醇洗涤2次，每次2分钟。PBS或生理盐水或TBS或TBST等用于免疫染色或荧光染料染色的溶液浸泡5分钟。然后就可以进行免疫荧光染色或其它荧光染料的染色了。1.石蜡切片厚8-10微米，切片脱蜡至水2.蒸馏水洗3

6、.硫堇水溶液染色（60度温箱内浸染30-60分钟）4.蒸馏水洗5.乙醇分化液迅速分化6.无水乙醇迅速脱水、透明、封固结果：尼氏体深兰色，细胞核淡兰色。上海源叶生物科技有限公司