《动物细胞培养》实验内容.doc

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1、《细胞工程实验技术》（动物细胞培养部分）目录实验一实验器材的清洗、包装和消毒1实验二常用的仪器设备介绍2实验三常用动物细胞培养用液的配制2实验四组织块原代培养、传代培养及生物学检测4实验五心肌细胞的原代培养、传代培养及培养细胞的常规检查6实验一实验器材的清洗、包装和消毒一、实验目的91、掌握细胞培养常用实验器材的清洗要领、清洗步骤和注意事项。2、掌握细胞培养常用器材的包装要领和要求。3、掌握正压滤器的安装、使用和拆除方法及操作注意事项。二、实验用品以组为单位包装物品1、量筒（100mL、500mL）2、大、小烧杯3个3、1000mL容量瓶×14、移液管1mL×3(灭菌)5、（100mL、2

2、50mL、500mL）盐水瓶、（500mL）广口瓶×各4(灭菌)6、眼科剪刀、眼科镊子各2把(灭菌)7、细胞培养瓶×3(灭菌)其它：饭盒、青霉素瓶、牛皮纸、离心管、滴管、注射器、磁棒、绳、标签纸等杂干。三、实验内容（一）清洗1、要领：浸泡、刷洗、酸泡。2、步骤：洗衣粉浸泡12h→刷洗→流水震荡冲洗15~20遍→漓水→蒸馏水洗荡2次→37℃烘干→待包装。3、注意事项：(1)使用后的器材要立即投入水中。(2)器皿内要充满液体，不得有气泡。(3)器材要用流水震荡干净。（二）包装1、大的器材如：量筒、广口瓶、培养皿、吸管等要包装。2、小的器材如：注射器、剪刀、镊子放入饭盒。3、注意事项：(1)包装

3、时手指与器材接触面积要小，手指不能触及器材使用端。(2)封闭器材使用端，标记器材手持端。(3)小包装(4)玻璃管道口加棉花。（三）湿热消毒：高压灭菌锅消毒四、作业1、清洗的要求为何较高？你认为该如何保证器皿中无杂质？2、器材包装有何要求？3、实验二常用的仪器设备介绍一、实验目的了解动物细胞培养中常用仪器设备的使用方法、注意事项和保养方法二、实验用品1）超净工作台2）自动双重纯水蒸馏器91）高压蒸气灭菌器2）过滤器3）电热恒温干燥箱4）二氧化碳培养箱5）冰箱6）倒置显微镜三、实验内容1、了解超净工作台的工作原理2、自动双重纯水蒸馏器结构、使用注意事项。3、高压蒸气灭菌器的工作原理4、正压过滤

4、器的使用方法5、二氧化碳培养箱的使用方法四、作业1、叙述超净工作台的工作原理2、正压过滤器为何会除菌实验三常用动物细胞培养用液的配制一、实验目的掌握常用动物细胞培养用液的组成及配制方法。二、实验用品与仪器量筒、烧杯、广口瓶、天平、各种无机盐、三、实验内容（一）平衡盐溶液的配制1、平衡盐溶液的配方如下：NaClKClCaCl2MgSO4·7H2ONa2HPO4·2H2OKH2PO4NaHCO3葡萄糖苯酚红9Hanks8.000.400.140.200.060.060.351.000.02D-Hanks8.000.400.060.060.350.02I组配Hanks（1000mL），V组配D-

5、Hanks（1000mL），其他各组不配平衡盐溶液。2、配制方法：（以Hanks液为例）(1)甲液：用约100mL蒸馏水溶解CaCl2，(2)乙液：用约750mL蒸馏水溶解Na2HPO4·2H2O、KH2PO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、NaCl、KCl。(3)将甲液徐徐加入乙液中。(4)将0.35gNaHCO4溶解在100mL蒸馏水中(5)用数滴NaHCO4液溶解0.02克酚红。(6)将4、5液移入3液中。(7)用双蒸水定容至1000mL，充分混匀，调节PH为7.4。4℃冰箱过夜。(8)滤过消毒，小瓶分装（500mL、250mL×2），冷藏。3、配制要求(1)配制后液体呈桃红色，PH

6、7.4左右，没有混浊和沉淀。(2)含Ca、Mg的物质要单独溶解。(3)用于分离细胞的消化液宜用无Ca、Mg离子的D-Hanks液或PBS液配制。（二）200mmol/l，L-谷氨酰胺（10mL）(II组配)方法：称取0.292g（M146.12）+双蒸水10mL→滤过除菌→-20℃保存。使用：每100mL培养基加1mLL-谷氨酰胺。（三）抗菌素液（青霉素、链霉素）(III组配)1、方法：10mLHangks液或双蒸水溶解100万链霉素，再用8mL链霉素溶解80万u的青霉素，成每毫升青霉素、链霉素各10万单位的母液。2、使用：100mL培养液加青、链霉素母液0.1mL。（四）RPMI-164

7、0基础培养液的配制(IV组配)甲液：RPMI-164010.4gHepes2.7g双蒸水700mL搅拌至颗粒完全溶解（橙红色）乙液：NaHCO32.2g双蒸水30mL30min颗粒完全溶解将甲、乙两液混合，加水至终1000mL定容，4℃冰箱静止2~3h，滤过除菌，分装（250mL、250mL、500mL）无菌试验，写好组号，-20℃保存。注意：用三天内制备的蒸馏水配制，培养基各成分是否完全溶解的判断方法：将培养液置室温或