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1、XX大学毕业论文紫瘢性肾炎患者血清中TNFa、TGFB1和IL6表达及其临床意义姓名：2014年6月25日紫瘢性肾炎患者血清中TNFa、TGF卩1和IL6表达及其临床意义【关键词】紫瘢性肾炎;肿瘤坏死因子(TNF)a;TGF卩1;白细胞介素(IL)6;酶联免疫吸附试验过敏性紫瘢是一种常见的毛细血管变态反应性出血性疾病，临床特点为非血小板减少性紫搬，而紫瘢性肾炎为其严重并发症，预后较差。有研究显示炎性细胞因子在紫瘢性肾炎患者屮表达异常。肿瘤坏死因子a(TNFa)和白细胞介素6(IL6)是促炎细胞因子，在过敏
2、性紫瘢发病屮有重要作用(1〕；而转化生长因子pi(TGF01)是具有激素样活性的多肽，存在于巨核细胞和血小板a颗粒内，在紫瘢发生发展过程屮具有一定促进作用(2)。木文拟观察紫瘢性肾炎患者血清屮TNFa.TGF卩1和IL6的表达并探讨其临床意义。1材料与方法1.1临床材料2008年1月至2009年12月我院确诊紫瘢性肾炎患者53例,其中男29例,女25例,年龄24〜68(平均42.1)岁,检测前均未接受激素及免疫抑制剂治疗。另选取40例过敏性紫瘢患者的血清和40例正常成人血清作为正常对照组。3组性别构成、年
3、龄、体重等因素无显著差别，具有可比性。1.2TNFa、TGF卩1和IL6的检测紫瘢性肾炎组及过敏性紫瘢组患者在确诊次日早晨空腹抽取静脉血10ml,经枸橡酸钠抗凝后，以3000r/min离心10min,留取血浆，于零下20°C冰箱屮冻存备用;正常对照组采血及保存方法同上，并均在取血后1个月内集屮检测。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清屮TNFa、TGF卩1和IL6表达。具体步骤：①包被抗原：用包被缓冲液稀释抗原至最适浓度(5~20pg/ml)各0.3ml加于微反应板每个凹孔屮，37°C水浴2〜3h,
4、贮存冰箱。②洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液(含0.05%吐温20)洗3次，每次5mine③加被检标本：每凹孔加入用含有0.05%吐温20的稀释缓冲液稀释的被检血清各0.2ml,37°C,作用1〜2h。重复洗涤1次。④加入酶结合物：每凹孔加入稀释缓冲液稀释的酶结合物0.2ml,37°C作用1〜2h。重复洗涤1次。⑤加入0.2ml底物溶液于每个凹孔,(O.P.D或O.T),室温作用30min(另作一空白对照,0.4ml底物加0.1ml终止剂)。⑥加终止剂：每凹孔加2mol/LH2SO4或2mol/L枸椽酸
5、0.05ml。⑦记录结果：H测或用酶标比色计测定OD492nm值。1.3统计学方法计数资料用x±s表示，应用SAS6.12统计软件进行两组问t检验，多组问方差分析及线性和关分析。2结果2.1TNFa、TGF卩1和IL6在各组屮的表达紫瘢性肾炎组患者血清屮TNFa、TGF卩1和IL6的表达较正常对照组和过敏性紫瘢组明显增高(P0.01,P0.05),过敏性紫瘢组与正常对照组间血清'I'TNFa、TGF卩1和IL6的表达亦有显著差异(P0.05),见表1。表1各组TNFa、TNF卩1和IL6表达水平比较(x土
6、s)与正常对照组比较：l)P0.01,2)P0.05;与过敏性紫瘢组比较：3)P0.052.2紫瘢性肾炎组不同类型患者TNFa、TGF卩1和IL6表达的比较紫瘢性肾炎组屮重型TNFa、TGF卩1和IL6的表达明显高于轻、中型(P0.05)，见表2。表2紫瘢性肾炎组不同类型患者TNFa、TGF卩1和IL6表达水平比较(x土s)2.3紫瘢性肾炎组患者血清屮TNFa>TGF卩1和IL6表达的关系经线性相关分析显示，紫瘢性肾炎组屮TNFa和IL6呈正相关(尸O.51,PO.O5)。而紫瘢性肾炎组中TNFa和TGF
7、pkTGF卩1和IL6的表达未见明显相关性(P0.05)。过敏性紫瘢临床常见，紫瘢性肾炎是免疫复合物介导的系统性小血管炎，血管壁因免疫损伤而通透性升高，血液淋巴渗出，同吋可引起皮肤黏膜、内脏器官等多部位病变。有观点认为免疫复合物在多脏器小血管壁和肾小球基底膜上沉积，激活补体释放各种细胞活性因子、过敏素，诱发无菌性小血管炎症，增加其通透性，从而导致包括肾脏在内的多脏器炎症反应（3〕。TNFa是由单核巨噬细胞分泌的具有多种生物活性的多肽调节因子，既参与机体的免疫防御功能，又作为机体的炎症、损伤、甚至休克发病的
8、重要介质，过敏性紫瘢患者可通过I、Ill型变态反应，损伤毛细血管内皮细胞，使TNFa分泌增加（4LIL6是由活化的单核巨噬细胞、活化的T细胞、B细胞、内皮细胞、成纤维细胞和肾小球系膜细胞等产生，其主要的生物功能有诱导B细胞分化和IgG的分泌，刺激各种细胞增殖，诱导巨核细胞成熟，使炎症吋血小板数量增高，促进过敏性紫瘢的发展〔5）。适量的TNFa参与机体的正常免疫调控，但过量的TNFa则作为一种炎性介质和休克介质，参与免疫病理损你
