大肠杆菌O157H7鞭毛蛋白和溶菌酶抑制剂蛋白的抗原表位验证Verification of antigenic epitopes of flagellin and lysozyme inhibitor proteins from Escherichia coli O157H7.pdf

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1、硕女学位论文大肠杆菌０１５７：Ｈ７鞭毛蛋白和溶菌酶抑制剂蛋白的抗原表位验证義，誦林敏玲爲＊巧乂學二〇—六年六月．Ｖ．１？．？．，Ｓ分类号％５２．４密级公开ＵＤＣ６％．０９硕±学位论文大肠巧茵０１５７；Ｈ７鞭毛蛋白和溶茵酶抑制剂蛋白的抗原表位验证林敏務学科专业基础兽医学指导教师规庭俊教授论文答辩日期２０１６年５月２８日学位授予日期２０１６年６月３０日答辩委员会主席梁万文研究员广西大学学位论文原创性和使用授权声明本人声明所呈交的论文，是本人

2、在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除己特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写的研巧成果，也不包含本人或他人为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料一。与我同工作的同事对本论文的研巧工作所做的贡献均已在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，即：学校有权保存并向国家有关部口或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可将学位论文的全部或部分内容编入有关

3、数据库进行检索和传播，可Ｗ采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本学位论文属于：□保密，在年解密后适用授权。Ｂ不保密。请在＂＂Ｗ上相应方框内打Ｖ（）论文作者签名：棘盛政日期：指导教师签名：日期，４．名作者联系电话：电子邮箱：大肠杆菌０：Ｈ７１５７鞭毛蛋白和溶菌酶抑制剂蛋白的抗原表位验证摘要一肠出血大肠杆菌０１５７：Ｈ７是种可由食品和水源传播的致病性强的人畜共患传染病原体，从首次分离来，世界各地出现不同规模的暴发及散，。肠出血大发流行，造成养殖业重大经济损失并时刻威胁着

4、人类的健康肠杆菌０１５７：Ｈ７由于感染程度不同，可导致患者血性腹泻、出血性结肠炎、溶血性尿毒症及血栓性血小板减少性紫薇，甚至死亡。世界卫生组织己将其与艾滋病、埃博拉出血热列为新兴传染病。鞭毛蛋白（Ｆｌａｇｅｌｌｉｎ，Ｆ舱）和溶菌酶抑制剂（Ｌｙｓｏｚｙｍｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒ／＼）都已被证实是肠出血大肠杆菌，＾０１５７Ｈ７初３。：期枯附和定植的重要毒力因子本研究首先分析鞭毛蛋白和溶菌酶抑制剂的氨基酸二级结构、亲水性、柔初性、，、抗原性表面性等信息综合考虑筛选出潜在的细胞抗原表位化－：段，并且通过生物合成法合成得到高

5、纯度片段則Ｃ３３８３４９－４７－ＫＡＡＳＥＧＳＤＧＡＳＬ、Ｆｌｉｃ４６０１ＡＴＤＴＮＫＤＹＡＰＡＩ、Ｉｖｙ１４６１５７ＳＬＥＮＨＰＤ畑师Ｋ。通过乳化多化免疫小鼠得到多克隆抗体，运用化ＩＳＡ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、间接免疫英光试验验证多克隆抗体的滴度、反应性、特异性。－－－－经过兰次免疫后ＥＬＩＳＡ测得ＡｎｔｉＦｌｉｃ３３８３４９、Ａｎｔｉ即Ｃ４６０４７１、Ａｎｔ－－－ｉＩｖｙｌ４６１５７、ＡｎｔｉＥＨＥＣ０１５７：Ｈ７多克隆抗体效价分别为１：１６００、１：６４００、１：６４００、１：１２８００，

6、结果表明多克隆抗体具有较高效价。Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ证实制备的多克隆抗体可只别天然蛋白，存在较高特异性；间接免疫焚Ｉ－－Ａｎｔｉ－Ｆ４９、Ａｎｔｉ－４７Ｈ光试验结果显示出ｌｉｃ３３８３Ｆｌｉｃ４６０１在ｅｌａ细胞外围有绿－－Ａｎｔ－Ｉ５７ｔ色焚光ｉｖｙｌ４６１ｅｌａｉＥＨＥＣ；在Ｈ细胞细胞质中强烈的绿色巧光；Ａｎ＇－５７Ｈｅ－０１：Ｈ７在ｌａ细胞胞质与夕围均显示绿色巧光；ＡｎｔｉＦｌｉｃ３３８３４９、［－Ａｎｔ－－－－ｉＦｌｉｃ４６０４７１、ＡｎｔｉＩｖｙｌ４６１５７、ＡｎｔｉＥＨＥＣ０１５７：Ｈ７的羡光强度值是正

7、２？＜０常对照组的４倍，与正常对照存在显著差异（．０５）；说明多克隆抗体ｐ的反应性良好。－－Ｆ－－抗体阻断抑制试验首先将Ａｎｔｉｌｉｄ３８３４９、ＡｎｔｉＦｌｉｃ４６０４７１、－－Ｉ５７－Ｈ７Ａｎｔｉｖｙｌ４６１、ＡｎｔｉＥＨＥＣ０１５７：多克隆抗体与大肠杆菌０１５７：Ｈ７预处理后，大肠杆菌０１５７：Ｈ７粘附Ｈｅｌａ细胞的能力减弱或丧失，焚光强度比？无预处理的降低２３倍，具有统计学差异，表明多克隆抗体可Ｗ与大肠杆５７Ｈ７１５７Ｈ７对Ｈｅｌａ菌０１：天然的蛋白结合，在体外成功阻断大肠杆菌０：细胞的粘附

8、。７天ＸＦＵ多肤免疫后攻毒半数致死量（２．８１１０化）的大肠杆菌０１５７：Ｈ７，７天－ｉｃ攻毒后免疫组和攻毒组都在排茜，但攻毒第７天Ｆｌ３３８３４９组、Ｆ－Ｉ－５