菊花的组织培养(使用.ppt

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1、专题3植物组织培养技术点此播放教学视频一、基础知识课题1：菊花的组织培养1、植物的组织培养（1）细胞的分化概念：在个体发育中，相同细胞的后代在形态、结构、生理功能上发生稳定性差异的过程点此播放教学视频原因：基因在特定的时间和空间条件下的选择性表达的结果结果：形成不同的细胞和组织（2）细胞的全能性①定义：已分化的细胞具有形成完整个体的潜能②原理：生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必需的全部基因点此播放教学视频高度特化的动物细胞，从整个细胞来说，全能性受到限制。

2、已分化的植物细胞，仍具有全能性③实例受精卵>生殖细胞>体细胞④全能性的比较:点此播放教学视频（3）植物组织培养细胞离体①必要条件：一定的营养物质、激素和其他外界条件②原理:细胞的全能性点此播放教学视频人参的愈伤组织菠萝的愈伤组织④过程:离体组织或细胞植物体脱分化愈伤组织芽根再分化点此播放教学视频点此播放教学视频点此播放教学视频人工种子点此播放教学视频2、影响植物组织培养的因素（1）植物材料的选择烟草和胡萝卜的组织培养较为容易枸杞愈伤组织的芽诱导比较难同一植物材料的年龄、保存时间的长短会影响实验结果菊

3、花的组织培养一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝点此播放教学视频点此播放教学视频（2）不同的离体组织和细胞对营养、环境等条件的要求相对特殊，需配置不同的培养基MS培养基主要成分包括：A、大量元素:N、P、K、Ca、Mg、S等点此播放教学视频B、微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co等C、有机物:如氨基酸、烟酸、肌醇、维生素，蔗糖等点此播放教学视频①常用的植物激素：生长素、细胞分裂素（3）植物激素的影响点此播放教学视频②生长素和细胞分裂素作用使用顺序实验结果先使用生长素，后使用细胞分裂

4、素有利于细胞分裂，但不利分化先使用细胞分裂素后使用生长素细胞即分裂也分化同时使用分化频率高点此播放教学视频生长素细胞分裂素：>有利于根的分化生长素细胞分裂素：<有利于芽的分化，抑制根的分化生长素细胞分裂素：＝促进愈伤组织生长③生长素和细胞分裂素同时使用，用量的比例对植物细胞发育方向的影响（4）pH、温度、光照pH控制在5.8左右，温度控制在18－22。C,每日用日光灯照射12h点此播放教学视频讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？点此

5、播放教学视频（一）制备MS固体培养基（二）外植体消毒（三）接种（四）培养（五）移栽（六）栽培二、实验操作点此播放教学视频实验录像点此播放教学视频二、实验操作（一）制备MS固体培养基MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4。C保存配制好的培养基母液来制备1、配置各种母液为了避免每次配制培养基都要称量几十种成分，减少工作量，可以将各种成分按比例配置成浓缩液，即培养基母液，一般将常用药品配成比所需浓度高10－100倍的母液。使用时，根据浓缩比例计算用量，加水稀释①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元

6、素浓缩100倍，常温保存②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量点此播放教学视频2、配置培养基分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml①配制培养液配制1LMS培养基，先将称好的琼脂加800ml蒸馏水，加热使琼脂溶化，然后加入蔗糖30g，取配制好的大量元素、微量元素、有机物和植物激素的母液，依次加入，加蒸馏水定容至1000ml②调PH③培养基的分装由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激

7、素点此播放教学视频3、灭菌分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝（二）外植体消毒2、消毒①流水冲洗菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右点此播放教学视频②酒精处理用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗③消毒液处理取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在无菌水中至少清洗3次，

8、漂净消毒液点此播放教学视频（三）接种污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空气消毒，酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射20分钟1、接种室消毒2、无菌操作要求操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。点此播放教学视频3、材料的切取和接种将装有培养基的锥形瓶整齐地排列在酒精灯左侧。将消过毒的菊花茎段在无菌培养皿中切成小段（长约0.5-1cm）。左手持锥形瓶。右手拉开捆扎锥形瓶的绳子，并