环境生物学实验指导书.doc

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1、实验一环境中有机物辛醇－水分配系数的测定（4学时）一、实验目的1．掌握有机物再不同相中分配系数的测定方法。2．学会使用分光光度计。二、实验原理环境中各种有机污染物，在不同环境条件下的分配系数是不同的，有机物在土壤中被吸附，经日光照射、雨水冲刷，可能进行转化和迁移，特别是有机物在生物体中可以被浓缩，进入食物链，因此，我们测定有机化合物在不同环境中的分配系数，对评价有机物在环境中的浓度比，以P表示：P＝[D]c/[D]a式中：[D]c――非水相的平衡浓度；[D]a――水相中有机物的平衡浓度。为了比较化合物在生物体重的富集情况，一般选用辛醇（n－Octanol）为非水相，得到正

2、辛醇－水分配系数Pow。由于辛醇中有机物的浓度难以测定，我们只选择水中有机物的浓度，根据测定的水相中分配前后有机物的浓度差，确定样品在有机相中的分配后的浓度，求得分配系数的计算公式：Pow＝（CoVoCwVw）/（CwVw）式中：Co――有机相初始浓度；Cw――分配平衡后水相浓度；Vo、Vw――分别为有机相和水相的体积。三、仪器和试剂1．仪器：7530分光光度计一台、振荡机一台、离心机一台、25mL容量瓶1个、塑料瓶8个、10mL离心管8个、1mL移液管8个、2mL一个、5mL一个、10mL一个、滴管一个。2．试剂：正辛醇、乙醇（95％）、对二甲苯（已配）、苯胺（已配）。

3、四、实验步骤（一）标准曲线的制作由100μg/mL标准溶液（对二甲苯）分别取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL于10mL容量瓶中，用蒸馏水稀释定容，在7530分光光度计上测定（波长为227nm）。取苯胺标准溶液（100μg/mL）1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，于10mL容量瓶中，用蒸馏水定容，在751分光光度计上测定（波长为279nm）。（二）分配系数的测定分别取已配制的苯胺－辛醇、对二甲苯－辛醇液1.0mL加入塑料瓶中，再加入9.0mL水，盖好，振荡3h。每个样品取三个平行样，并作空白样振荡后的样品，转移到离心管中，离心分离，用滴管吸去有机相，重复离心

4、一次，其水样分别再227nm和279nm测定两种样品的浓度。五、结果与讨论1．测得的结果再标准曲线上查得浓度制表。2．由公式计算其分配系数。3．根据两种样品的结果进行必要的讨论。实验二水体中溶解氧及其饱和度的测定（碘量法）（2学时）一、实验目的1、掌握水样溶解氧的测定方法2、了解溶解氧饱和度的效应及意义二、方法原理水样中加入硫酸锰和碱性碘化钾，水中溶解氧将低价锰氧化成高价锰，生成四价锰的氢氧化物棕色沉淀。加酸后，氢氧化物沉淀溶解并与碘离子反应释放出游离碘，以淀粉做指示剂，用硫代硫酸钠滴定释放出的碘，可计算溶解氧的含量。三、仪器与试剂250～300ml溶解氧瓶，硫酸锰溶液，

5、碱性碘化钾溶液，（1+5）硫酸溶液，1%淀粉溶液，0.025mol/L重铬酸钾标准溶液（用于标定硫代硫酸钠溶液），硫代硫酸钠溶液。硫代硫酸钠溶液的标定：于250ml碘量瓶中，加入100ml水和1g碘化钾，加入10.00ml0.025mol/L标准溶液和5ml(1+5)硫酸溶液，密塞，摇匀。于暗处静置5min后，用硫代硫酸钠溶液滴定至溶液呈淡黄色，加入1ml淀粉溶液，继续滴定至蓝色刚好褪去为止，记录用量。式中：M——硫代硫酸钠溶液的浓度（mol/L）；V——滴定时消耗硫代硫酸钠溶液的体积（ml）。四、实验步骤1、采样：用水样冲洗溶解氧瓶后，沿瓶壁直接倾注水样或用虹吸法将吸管

6、插入溶解氧瓶底部，注入水样至溢流出瓶容积的1/3～1/2。采样时不使水样曝气或有气泡残存在溶解氧瓶中，并存于冷暗处。2、溶解氧的固定：用吸管插入溶解氧瓶的液面以下，加入1ml硫酸锰溶液、2ml碱性碘化钾溶液，盖好瓶塞，颠倒混合数次，静置。待棕色沉淀物降至瓶内一半时，再颠倒混合一次，待沉淀物下降到瓶底。一般在取样现场固定。3、析出碘：轻轻打开瓶塞，立即用吸管插入液面下加入5.0ml硫酸，小心盖好瓶塞，颠倒混合摇匀至沉淀物全部溶解为止，放置暗处5min。4、滴定：移取100.0ml上述溶液于250ml锥形瓶中，用硫代硫酸钠溶液滴定至溶液呈淡黄色，加入1ml淀粉溶液，继续滴定至

7、蓝色刚好褪去为止，记录硫代硫酸钠溶液用量。5、.计算式中：M——硫代硫酸钠溶液的浓度（mol/L）；V——滴定时消耗硫代硫酸钠溶液的体积（ml）。五、结果与讨论1、分析该水体的溶解氧饱和度2、评价该水体水质六、注意事项如果水样呈强酸性或强碱性，可用氢氧化钠或硫酸溶液调至中性后测定。实验三富营养化水体中叶绿素a的测定（2学时）一、实验目的1、掌握水样叶绿色a的测定方法2、了解叶绿素a对水体富营养化评价的意义二、实验原理：许多参数可用作水体富营养化的指标，常用的是总磷、叶绿素-a含量和初级生产率的大小（见表7-1）。测定水体中的叶