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1、环境微生物学实验指导书王华主编江西农业大学国土资源与环境学院2007年10月目录微生物实验须知……………………………………………………………3实验一显微镜使用与细菌染色法………………………………………5实验二放线菌与霉菌形态观察…………………………………………10实验三污水环境细菌运动性与原生动物、藻类的形态观察…………11实验四微生物的大小测定与数量的测定………………………………12实验五培养基的制备与灭菌……………………………………………16实验六环境微生物的分离与生理鉴定实验……………………………18实验七环境
2、微生物分离与生理鉴定结果检查…………………………22实验八水中总大肠菌群的测定－多管发酵法…………………………242微生物实验须知微生物学实验课的目的是：训练学生掌握微生物学最基本的操作技能；了解微生物学的基本知识；加深理解课堂讲授的某些微生物学理论。同时,通过实验,培养学生观察、思考、分析问题和解决问题的能力；实事求是、严肃认真的科学态度以及勤俭节约、爱护公物的良好作风。为了上好微生物学实验课,并保证安全,特提出如下注意事项：1．每次实验前必须对实验内容进行充分预习,以了解实验的目的、原理和方法,做到心中有数,思路
3、清楚。2．认真及时做好实验记录,对于当时不能得到结果而需要连续观察的实验,则需记下每次观察的现象和结果,以便分析。3．实验室内应保持整洁,勿高声谈话和随便走动,保持室内安静。4．实验时小心仔细,全部操作应严格按操作规程进行,万一遇有盛菌试管或瓶不慎打破、皮肤破伤或菌液吸入口中等意外情况发生时,应立即报告指导教师,及时处理,切勿隐瞒。5．实验过程中,切勿使酒精、乙醚、丙酮等易燃药品接近火焰。如遇火险,应先关掉火源,再用湿布或沙土掩盖灭火。必要时用灭火机。6．使用显微镜或其他贵重仪器时,要求细心操作,特别爱护。对消耗材料
4、和药品等要力求节约,用毕后仍放回原处。37．每次实验完毕后,必须把所用仪器抹净放妥,将实验室收拾整齐,擦净桌面,如有菌液污染桌面或其他地方时,可用3%来苏尔液或5%石炭酸液覆盖其上半小时后擦去,如系芽孢杆菌,应适当延长消毒时间。凡带菌之工具(如吸管、玻璃刮棒等)在洗涤前须浸泡在3%来苏尔液中进行消毒。8．每次实验需进行培养的材料,应标明自己的组别及处理方法,放于教师指定的地点进行培养。实验室中的菌种和物品等,未经教师许可,不得携出室外。9．每次实验的结果,应以实事求是的科学态度填入报告表格中,力求简明准确,并连同思考
5、题及时汇交教师批阅。10．离实验室前应将手洗净,注意关闭门窗、灯、火、煤气等。4实验一显微镜使用与细菌染色法一、实验目的1．学习掌握显微镜的结构、功能和使用方法。2．学习掌握细菌简单染色和革兰氏染色方法。二、显微镜的结构与功能1．显微镜的结构显微镜有机械装置和光学系统两大部分组成。机械装置主要作用是使光学系统，紧固在一个光轴直线上，而且可精确地调节各光学系统部件之间的距离，使显微镜产生清晰的物象。其组成包括：①镜座和镜臂；②镜筒；③物镜转换器；④载物台；⑤调焦装置（粗调节器和细调节器）。光学系统使显微镜最主要地部分，
6、起分辨和放大目的物地作用。其组成包括：①目镜；②物镜；③集光器；④反光镜；⑤光源（自然光源和电光源）。光学显微镜基本结构：1.照明灯(Lamp)2.聚光器(Condenser)3.载物台和切片夹(Mechanicalstageandspecimenretainer)4.推进器(Mechanicalstageadjustmentknob)5.物镜(Objectives)6.粗细螺旋(Courseandfinefocusknob)7.目镜(Oculars)8.照相机等接口(Connectiontocamera,etc.)
7、52．显微镜的成像原理标本得到足够的照明由标本反射或折射出的光线经物镜进入使光轴与水平面倾斜45度的棱镜，在目镜的焦平面上，即在目镜的视场光阑处，成放大的侧光实像，该实像在经目镜的接目透镜放大成虚像，所以人们看到的实虚像。3．分辨力与数值孔径显微镜的光学技术参数包括：数值孔径、分辨率、放大率、焦深、视场宽度、覆盖差、工作距离等等。这些参数并不都是越高越好，它们之间是相互联系又相互制约的，在使用时，应根据镜检的目的和实际情况来协调参数间的关系，但应以保证分辨率为准。61．数值孔径数值孔径（又称开口率numericala
8、perture简写NA）是物镜和聚光镜的主要技术参数，是判断两者（尤其对物镜而言）性能高低的重要标志。其数值的大小，分别标刻在物镜和聚光镜的外壳上。数值孔径是光线投射到物镜上的最大开口角度一半的正弦，乘上标本与物镜间介质的折射率的乘积。用公式表示如下：NA=nsinu/2成正比，与焦点的距离成反比。显微镜观察时，若想增大NA值，孔径角是无法增大
