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1、资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。实验一普通光学显微镜的使用及其对微生物一般形态的观察一、实验目的1．了解普通光学显微镜的构造及其各部分的作用。2．掌握普通光学显微镜的正确使用和维护方法。3．经过低倍镜、高倍镜观察藻类、酵母培养液和新鲜活性污泥中微生物的一般形态。二、实验原理普通光学显微镜由机械部分和光学部分组成。图1-1双目生物显微镜1．机械部分:(1)镜筒:位于镜臂上端的空心圆筒,是光线的通道。镜筒的上端可插入目镜,下面与转换器相连。(2)转换器:位于镜筒下端,是一个能
2、够旋转的圆盘。有3~4个孔,用于安装不同放大倍数的物镜。(3)载物台:载物台是放置标本的方块平台,中央有透光孔,载物台上面有玻片夹持器,侧面有移动手轮,可纵向和横向移动标本。(4)调焦手轮:包括粗调手轮和微调手轮,可使载物台上下升降,调节物资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。镜和标本之间的距离。2．光学部分:(1)目镜:放在镜筒上,配有10倍(10×)、16倍(16×)两种。(2)物镜:装在转换器的孔上,有低倍镜(4、10)、高倍镜(40)和油镜(100),是显微镜中最主要的
3、部分。各种镜头上都刻有放大倍数和数值孔径(NA)及所要求盖玻片厚度等主要参数。物镜的性能由数值孔径决定,而且还依赖于物镜的分辨率。(3)聚光器:由聚光镜和孔径光阑组成。聚光镜的作用是把光线聚集在标本上,增强照明度。孔径光阑是用来调节对比度的,使物镜和聚光器的数值孔径相符合。当孔径光阑开启到物镜出瞳的70~80%时,就能够得到足够对比度的良好图象。如果开得太大,超过物镜的数值孔径,就会产生光斑;如果开得太小,则分辨率下降,降低物像的清晰度。(4)电光源:在显微镜的下部,提供观察标本时所用光源。三、实验器
4、材1．普通光学显微镜(双目生物显微镜)2．载玻片、盖玻片若干3．玻璃棒、滴管4．滤纸、擦镜纸5．藻类、酵母培养液,新鲜活性污泥四、实验方法１．低倍镜的操作(１)首先把目镜放入镜筒上,将物镜(4、10、40、100)旋紧在转换器上。(2)标本放在载物台上,用玻片夹持器挟紧。并用移动手轮移动所要观察的目的物到圆孔的正中央。(３)打开电源开关,调整聚光器,使光路对准载物台中央的光孔,光亮资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。度要适宜。(４)旋动转换器,将10倍物镜对准光孔。(5)用粗
5、调焦手轮使物镜与标本距离至最小,同时要侧脸观察,以免压坏标本玻片或损坏物镜。(6)调节瞳距。(7)眼睛接近目镜观察,左(右)手用移动手轮轻轻移动玻片夹持器,右(左)手用粗调焦手轮将载物台下移(向内旋转调焦手轮),如果见到目的物,但不是十分清楚,再用细调焦手轮调节,至目的物清晰为止。(8)如果粗调焦手轮旋得太快,超过焦点,必须从第(5)步重调,不要在正视目镜的情况下调粗调手轮,防止没有把握的旋转使物镜与载玻片相撞碰坏。注:观察时两眼同时睁开,双眼不感觉疲劳。2．高倍镜的操作(1)使用高倍镜前,先用低倍镜
6、观察(操作方法同低倍镜的操作)。(2)旋动转换器,换用高倍镜(40)观察,如果高倍镜触及载玻片应立即停止旋动,说明原来低倍镜观察没有调准焦距,目的物没有找到,须用低倍镜重新调节。如果调节正确,换用高倍镜时基本能够看到目的物,如果模糊,用微调焦手轮稍微调节一下就清晰可见。3．微生物形态观察取一干净的载玻片,用滴管或玻璃棒在培养液内沾一滴菌液,用干净的盖玻片覆盖在滴液上(注意不要有气泡)即成标本片,用低倍镜和高倍镜观察。记录微生物的形态特征。四、实验记录及结果表1-1微生物的形态观察记录项目放大倍数低倍镜
7、观察高倍镜观察资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。五、思考题1．镜检标本时,为什么要先用低倍物镜观察?2．画一个细胞结构的示意图。实验二微生物的计数(酵母菌的显微镜直接计数)一、实验目的1．了解并掌握常见的血球计数板的构造。2．学会一般的显微镜直接计数方法。二、实验原理测定微生物数量方法很多,一般采用的有显微镜直接计数法和平板计数法。镜检计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液,如有杂菌或杂质常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板;一般细菌则采用彼得罗夫·霍
8、泽(PetroffHausser)细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同,只是细菌计数板较薄,能够使用油镜观察。而血球计数板较厚,不能使用油镜,故细菌不易看清。血球计数板是一块特制的厚载玻片,载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各有一个方格网(图2-1)。每个方格网共分9大格,其中间的一大格(称为计数室)常被用作微生物的计数。计数室的刻度有两种:一种是大方格分为16个中方格,而每个中方格又分成25个小
