毛细管等电聚焦分析蛋白质的方法研究.pdf

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1、毛细管等电聚焦分析蛋白质的方法研究刘莉丹2015年6月中图分类号：Q819UDC分类号：毛细管等电聚焦分析蛋白质的方法研究作者姓名刘莉丹学院名称生命学院指导教师屈锋教授答辩委员会主席张小玲教授申请学位工学硕士学科专业生物工程学位授予单位北京理工大学论文答辩日期2015年6月ProteinsanalysisbasedoncapillaryisoelectricfocusingCandidateName：LidanLiuSchoolorDepartment:SchoolofLifeScienceFacultyMentor:Prof.FengQuChair,The

2、sisCommittee：Prof.XiaolingZhangDegreeApplied:MasterofEngineerringMajor：BioengineeringDegreeby:BeijingInstituteofTechnologyTheDateofDefence：June，2015研究成果声明本人郑重声明：所提交的学位论文是我本人在指导教师的指导下进行的研究工作获得的研究成果。尽我所知，文中除特别标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得北京理工大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作

3、的合作者对此研究工作所做的任何贡献均已在学位论文中作了明确的说明并表示了谢意。特此申明。签名：日期：北京理工大学硕士毕业论文摘要等电点（Isoelectricpoint,pI）是蛋白质、多肽、微生物、细胞及细胞器等两性生物微粒的重要理化参数之一。毛细管等电聚焦（Capillaryisoelectricfocusing,cIEF）是基于毛细管电泳技术测定两性物质等电点的方法。利用cIEF不仅可以表征不同等电点的蛋白质和多肽，实现对样品各组分的分离检测，还可研究分子间的相互作用。激光诱导荧光检测是高灵敏检测技术，检出限低、检测时间短、样品用量少、可实现在线检测。

4、毛细管等电聚焦结合激光诱导荧光检测具有高效、快速、高灵敏的优势。本论文主要包括以下工作：（1）比较了毛细管等电聚焦电泳一步法和两步法，并通过对样品溶液组成、进样量、聚焦电压、电极液pH等实验参数进行优化，改进了毛细管等电聚焦电泳一步法。结果表明改进后的一步法分离速度快、聚焦完全、步骤简单、适应性广。（2）将毛细管等电聚焦电泳一步法应用于多种融合蛋白的分析检测。结果表明方法的分离度、线性关系令人满意，实验测定的等电点值与蛋白的生产厂家估测的理论值基本一致。表明该方法可用于实际样品中蛋白质的分离纯化、质量控制、稳定性评价以及等电点测定。（3）将cIEF-LIF和

5、毛细管区带电泳（CZE-LIF）方法用于绿色荧光蛋白的分析，优化了分离电压、缓冲液pH、电极液pH等实验参数，为进一步研究绿色荧光蛋白（以及其他荧光蛋白）与核酸的相互作用，以及筛选荧光蛋白的核酸适配体奠定了实验基础。关键词：毛细管电泳；毛细管等电聚焦；激光诱导荧光检测；绿色荧光蛋白；融合蛋白；等电点测定I北京理工大学硕士毕业论文AbstractTheisoelectricpoint(pI)isoneofthemostimportantphysicochemicalparametersofamphotericbiologicalparticles,suchas

6、proteins,polypeptides,microorganisms,cellsandorganelles.Thecapillaryisoelectricfocusing(cIEF)isthemethodtodeterminethepIofamphotericsubstances,whichisbasedthetechnologyofcapillaryelectrophoresis.cIEFcannotonlybeusedtocharacterizeproteinsandpeptideswithdifferentpI,butalsotoseparatea

7、nddetectmultiplesamplecomponents.Moreover,thestudyofintermolecularinteractionscanaslobeaccomplishedbycIEF.Thelaser-inducedfluorescence(LIF)detectionisonehighlysensitivedetectiontechnology,whichhastheadvantagesoflowdetectionlimit,shortdetectiontime,lowsampleconsumptionandonlinetesti

8、ng.ThecIEFcoupledwithLIFde