课题1菊花的组织培养（PPT31页).ppt

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1、菊花的组织培养植物的组织培养又叫离体培养，指植物的组织、器官或细胞等在离体条件下，通过无菌操作，在人工控制条件下（一定的营养物质、激素、温度等其他外界条件）进行培养以获得再生的完整植株的技术。一、植物组织培养的概念概念：原因：（回想）植物组织培养原理：植物细胞的全能性细胞的全能性是指已分化的细胞具有发育成完整个体的潜能。生物体的每一个细胞都是由同一个受精卵有丝分裂而来，都含有该物种所特有的全套遗传物质高度特化的动物细胞，从整个细胞来说，全能性受到限制。但它的细胞核仍然保持着全能性，这是因为细胞核内含有该物种遗传性所需

2、要的遗传物质.已分化的植物细胞，仍具有全能性.实例受精卵>生殖细胞>体细胞全能性的比较:什么叫分化？（其实质是什么?）什么是愈伤组织？愈伤组织的细胞有什么特点？什么叫脱（去）分化、再分化？如何控制细胞的脱分化与去分化？（阅读32-33页解决下列问题）二、植物组织培养的基本过程基因的选择性表达愈伤组织人参的愈伤组织菠萝的愈伤组织二、植物组织培养的基本过程或胚状体三、影响植物组织培养的因素：1、材料（外植体）的选取（1）不同植物的组织培养难度不同什么样的植物容易进行组织培养？（2）同一种植物的不同组织培养难度不同什么样的

3、组织容易进行组织培养？容易进行无性生殖的植物，如烟草、胡萝卜幼龄、保存时间短的组织菊花的组织培养一般选用何种材料？未开花植物的茎上部新萌生的侧枝2、营养成分（培养基）（1）植物组织培养常用的培养基？MS培养基大量元素：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等（2）MS培养基的主要成分？培养基中的各种成分的作用是什么？大量元素和微量元素提供植物细胞需要的各种无机盐；蔗糖提供碳源的同时维持细胞渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是满足

4、离体植物细胞的特殊营养物质需求课本33页旁栏思考：微生物培养基以有机营养为主，MS培养基则需提供大量无机营养3、植物激素（1）关键激素是什么？（2）两种激素的使用顺序不同，结果不同（3）两种激素的用量比不同，植物发育方向不同4、pH、温度、光照等菊花组织培养的PH？温度？光照？植物组织培养过程:离体组织或细胞植物体脱分化细胞分裂素≈生长素愈伤组织芽根细胞分裂素>生长素细胞分裂素<生长素再分化植物细胞培养不需要光?需要光植物组织培养的过程离体的植物组织或细胞愈伤组织根和芽完整的植物体脱分化再分化制备MS固体培养基外植体

5、消毒接种培养栽培四、实验操作移栽流水冲洗—无菌纸吸干—70%酒精—无菌水冲洗—无菌纸吸干—0.1%氯化汞—无菌水冲洗至少三次之上（流水是为消毒吗？能消毒的是什么？无菌水冲洗是为了干啥？）（哪6步？）1、配制各种母液（大量元素、微量元素各浓缩多少倍？用量较小的有机物呢？）2、配制培养基（菊花组培是否添加植物激素？）3、灭菌（哪种灭菌方法？）注意接种时的各种无菌操作。将菊花茎段插入培养基时特别应注意什么？最好在哪儿培养？温度？光照？定期消毒？直接移栽到土壤中吗？MS固体培养基成分及比例(一)制备MS固体培养基（四）培养1

6、、愈伤组织的培养从接种外植体到出现愈伤组织需经过2周时间。2周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄色的瘤状愈伤组织。首次培养愈伤组织时，恒温箱的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈伤组织长的更快。2周后，培养基成分接近耗尽，必须更换培养基，进行继代培养.继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同，在严格的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外植体一起移到新培养基上。愈伤组织的继代培养一代为20d。如果延长时间，培养基中营养物质减少，外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。如果愈伤组织长到直径为1－1.5cm时，就可以进行试

7、管苗培养.2、愈伤组织的继代培养在愈伤组织继代培养期间，将恒温箱的门打开，让愈伤组织见光，愈伤组织见光后颜色可以转为绿色.3、试管苗的培养当愈伤组织长到一定大小后，可以更换培养基，进行试管苗的见光培养.（五）移栽移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日.1、打开封口膜2、清洗转移用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间.蛭石珍珠岩（六）栽培3、移栽珍珠岩：固体基质型，含水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培.幼苗长壮后，移栽到土壤中.幼苗移栽后，每天观

8、察并记录幼苗的生长情况，适时浇水、施肥，直至开花.1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯——灼烧）4、无菌箱中的培养；5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？35页旁栏思考：至少做一组以上的重复。对照实验用一个不接种的空白培养基与接种的培养基一同培养