C-jun 在慢性支气管炎大鼠肺中表达及及气道重塑间关系探析.doc

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1、C-jun在慢性支气管炎大鼠肺中表达及及气道重塑间关系探析【摘要】目的观察香烟暴露诱导慢性支气管炎模型大鼠肺组织中cjun表达及与小气道重塑间关系。方法40只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、吸烟30d组（I组）、吸烟60d组（II组）及吸烟90d组（III组）；被动吸烟诱导大鼠慢性支气管炎模型，镜下比较各组大鼠细支气管平滑肌及胶原层变化，免疫组织化学法检测肺组织中Cjun表达蛋白JUN的水平。结果吸烟大鼠30d后气道发生明显慢性炎症变化，与对照组比较，II组、III组大鼠细支气管管壁厚度与气管外径比值（MT%）及管壁面

2、积与气管总面积比值（MA%）显著增高（P〈005）；I组、II组、III组大鼠肺组织JUN表达显著增强，且呈逐渐增加趋势。结论被动吸烟导致大鼠慢性支气管慢性炎症及气道结构重建，cjun表达的增高可能在小气道重塑过程中起重要作用。【关键词】吸烟；慢性支气管炎；cjun；气道重构1材料与方法11主要试剂及仪器CJun兔多克隆抗体、鼠抗兔二抗为SantaCruz产品；SABC免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥生物技术公司。Masson胶原染色试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司。HPLAS1000高清晰度彩色病理报告分析仪及计算机

3、图象处理系统及相应软件（德国Opten）o12动物模型的建立、分组及标本处理实验动物为清洁级SD大鼠，2个月龄雄性大鼠40只，体重（200±20）g,购自中山大学中山医学院实验动物中心。大鼠随机分为正常对照组、吸烟30d组（I组）、吸烟60d组（II组）、吸烟90d组（III组），每组均为10只。参照许三林等的方法制作被动吸烟装置［1L实验香烟为武汉市售红双喜牌香烟（武汉卷烟厂制），尼古丁含量为每支lmg,焦油含量每支18mgo吸烟组放人自制的吸烟箱中，每次点燃2支香烟放入，燃烧10min,休息5min后再放入2支香烟

4、，每天吸烟40支，每周吸烟6d。分别在吸烟30、60、90d后处死各组大鼠。分离肺组织，左下叶置于4%甲醛固定液中保存，常规石蜡包埋、切片4um,组织学检查（HE与Masson染色）及免疫组化备用。13指标观察131肺细小支气管病理及形态学测定石蜡切片做Masson染色，测定直径在750〜1100微米之间，长径与短径之比不小于07的膜性细支气管的外径、管壁厚度（中膜肌层）、管壁面积和气管总面积，然后计算管壁厚度与气管外径比值（MT%）,管壁面积与气管总面积比值（MA%）,并计算出均数，作为大鼠的肺细小支气管气道重构定量

5、指标观察。132Cjun基因表达蛋白JUN免疫组化染色采用链霉亲和素过氧化氢物酶法（SABC法），实验步骤严格按照试剂盒说明书进行操作；用001mol/L磷酸盐缓冲液和正常羊血清取代一抗作为空白对照与替代对照。光镜下每张切片随机选5个含有完整支气管横断面的区域，计算阳性细胞个数并作分析。14统计学处理全部数据均以x±s表示。数据采用SPSS110软件进行方差分析，以LSD法进行不同组别之间的两两比较。2结果21HE染色观察HE染色镜下观察：对照组气管、肺泡组织结构正常；I、II组大鼠肺组织中可见明显慢性细支气管炎，炎症

6、侵犯细支气管全层，炎症细胞侵及全层（包括固有膜、中膜肌层和外膜），炎症细胞包括单核巨噬细胞、淋巴细胞、浆细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞等多种细胞,以单核巨噬细胞、淋巴细胞为主，黏膜下腺体增生明显（图2）；而III组大鼠与I、II组比较，除细支气管全层炎症变化外，可见到小气道全层炎症向周围肺组织扩散，细支气管中膜肌层平滑肌显著增生、肥厚，排列紊乱，并有广泛的肺气肿形成。22各组大鼠细支气管平滑肌层及胶原厚度的比较Masson染色：对照组及I组大鼠细支气管平滑肌层菲薄，II、Ill组细支气管中膜肌较正常组显著增生肥厚（P〈

7、005）。23各组大鼠肺组织JUN表达的比较正常对照组大鼠肺内几乎无JUN蛋白阳性染色，I组大鼠气道JUN蛋白表达较对照组明显增加（P〈005）,胞核棕黄色阳性细胞主要于气道上皮细胞、炎性细胞和平滑肌细胞，II、III组大鼠JUN蛋白阳性细胞多分布于气道平滑肌层及炎性细胞中（P<005）o3讨论慢性支气管炎小气道慢性炎症持续存在，迁延进展，气道炎症导致的组织损伤修复反应可出现气道重构，平滑肌细胞增生及结缔组织沉着，从而使末梢气道腔内呈物理性狭窄，导致肺功能进行性减退。cjim是禽肉瘤逆转录病毒基因ASV17的细胞内同源

8、基因，由Bohmann于1987年发现[2]。Cjun原癌基因产物Jun为39kD蛋白，与原癌基因cfos产物Fos结合形成异二聚体AP1或多聚体型反式因子，经由亮氨酸拉链与DNA上相应基因增强子结合起正调控作用。细胞内cjun借助于其碱性亮氨酸拉链和Jun家族的其他成员或Fos家族成员形成同源或异源二聚体，组成AP1转录因子，结