现代生物制药工艺学 第二版课件 教学课件 作者 齐香君 主编第十一章.ppt

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1、第十一章多肽与蛋白质类药物多肽类药物的制备2蛋白质类药物的制备3概述111.1概述生物技术在该类药物中的应用2基本概念111.1.1基本概念多肽类生化药物是以多肽激素和多肽细胞生长调节因子为主的一大类内源性活性成分。蛋白质生化药物包括蛋白质类激素、蛋白质细胞生长调节因子、血浆蛋白质类、黏蛋白、胶原蛋白及蛋白酶抑制剂等，其作用方式从对机体各系统和细胞生长的调节，扩展到被动免疫、替代疗法和抗凝血等。见P154表11-1细胞生长刺激因子11.1.2生物技术在该类药物中的应用活性多肽和蛋白是生化药物中非常活跃的一个领域，20世纪70年代以后，随着基因工程技

2、术的兴起和发展，人们首先把目标集中在应用基因工程技术制造重要的多肽和蛋白质药物上，已实现工业化的产品有胰岛素、干扰素、白细胞介素、生长素、EPO、tPA、TNF等，现正从微生物和动物细胞的表达向转基因动、植物方向发展。见P115表11-2用DNA重组技术生产的人类蛋白药物见P156表11-3欧美已批准上市的重组人类多肽和蛋白药物11.1.2生物技术在该类药物中的应用11.2多肽类药物的制备多肽药物的制备2多肽类药物111.2.1多肽类药物多肽激素多肽类细胞生长调节因子含有多肽成分的组织制剂11.2.2多肽药物的制备1.降钙素（1）结构与性质降钙素

3、是由32个氨基酸残基组成的单链多肽，相对分子质量约3500，N端为半胱氨酸，它与7位上的半胱氨酸间形成二硫键，C端为脯氨酸。降钙素溶于水和碱性溶液，不溶于丙酮、乙醇、氯仿、乙醚、苯、异丙醇及四氯化碳等，难溶于有机酸。25℃以下避光保存可稳定存放两年，水溶液于2～10℃可保存7天。降钙素的活性可被胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶、多酚氧化酶、H2O2氧化、光氧化及N溴代琥珀酰亚胺所破坏。11.2.2多肽药物的制备（2）生产工艺工艺流程11.2.2多肽药物的制备②工艺过程及控制要点猪甲状腺经绞碎，丙酮脱脂，制成脱脂甲状腺粉27kg，加入01mol/

4、L盐酸1540L，加热至60℃搅拌1h。加水1620L混匀，搅拌1h，离心，沉淀用水洗涤，合并上清液和洗液再搅拌2h后离心。收集上清液，加入15L异戊醇-醋酸-水（20∶32∶48）的混合液，搅匀，加热至50℃，用硅藻土作助滤剂过滤，收集沉淀。沉淀溶于8L0.3mol/L氯化钠溶液中，用10%盐酸调节pH=2.5，离心除去不溶物。11.2.2多肽药物的制备收集离心液，溶液用10倍水稀释后，通过CMC（5cm×50cm）柱，柱先用0.02mol/L醋酸盐缓冲液（pH=4.5）平衡。收集含有降钙素的溶液，冻干或用2mol/L的氯化钠盐析，制得降钙素粉末

5、，含量为3.6U/mg。在此基础上还可进一步纯化。11.2.2多肽药物的制备③生物活性测定样品用经过0.1mol/L醋酸钠溶液稀释过的0.1%白蛋白溶液溶解，取0.2mL样品按倍比稀释法配制，选用雄性大白鼠，静脉注射后1h收集血液。血样品的血清钙值采用原子吸收光谱法测定，对照采用从猪甲状腺中提取的MRC标准品。将标准品稀释至所需要的稀释度2.5MRCmU/0.2mL、5MRCmU/0.2mL、10MRCmU/0.2mL和20MRCmU/0.2mL，然后用同样方法给大鼠注射，1h后测定血清钙值。11.2.2多肽药物的制备2.胸腺激素11.2.2多肽药

6、物的制备临床用于以下方面：①原发性和继发性免疫缺陷病，如反复上呼吸道感染等②自身免疫病，如肝炎、肾病、红斑狼疮、类风湿关节炎、重症肌无力等③变态反应性疾病，如支气管哮喘等④细胞免疫功能减退的中年人和老年人疾病，并可抗衰老⑤肿瘤的辅助治疗。11.2.2多肽药物的制备（1）结构与性质胸腺素组分5是由在80℃热稳定的40～50种多肽组成的混合物，相对分子质量在1000～15000之间，等电点在3.5～9.5之间。为了便于不同实验室对这些多肽的鉴别和比较，根据它们的等电点以及在等电聚焦分离时的顺序而命名，共分三个区域：α区包括等电点低于5.0的组分，β区包

7、括等电点在5.0～7.0之间的组分，γ区则指其等电点在7.0以上者（此区内组分很少）。11.2.2多肽药物的制备对分离的多肽进行免疫活性测定，有活性的称为胸腺素，如胸腺素α1，无活性者则称之为多肽，如多肽β1。现已清楚，胸腺素组分5中，胸腺素α1、α5、α7等是具有调节胸腺依赖性淋巴细胞分化和体内外免疫反应的活性组分。11.2.2多肽药物的制备（2）生产工艺工艺流程11.2.2多肽药物的制备②工艺过程及控制要点将新鲜或冷冻胸腺除脂肪并绞碎后，加3倍量生理盐水，于组织捣碎机中制成匀浆，14000g离心，得提取液（组分1）。提取液80℃加热15min，

8、以沉淀对热不稳定部分。离心去掉沉淀，得上清液（组分2）。上清液冷至4℃，加入5倍体积的-10℃丙酮，过滤收集沉淀，干燥后得