NEB产品知识和市场(ppt)-NEB产品知识和市场.ppt

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1、NEB产品知识和市场培训2001年8月市场与技术支持部第一部分NEB厂家背景回顾美国总部：Beverly,MA1975~2001支柱产品——工具酶先进的基因克隆和高表达体系的构建技术120种自主开发的酶60多种酶是由NEB首先筛选到并进入商品化生产二十五年的生产历史国际化的生产和营销网络在全世界35个国家和地区有分销商美国、英国、德国、加拿大四个生产基地专业水准的厂商发酵中心——生产部酶制备和DNA重组技术中心——研发部分子生物学和寄生虫学研究中心——基础研究院第二部分NEB产品讲解核酸工具酶DNA限制性内切酶DNA聚合酶、逆转录酶Vent系列的PCR

2、聚合酶DNA/RNA修饰酶单位的定义在50l反应体系中，1小时内，完全消化1g的DNA所需要的酶量为1Unit包装与规格常用酶大多数为10U/l缓冲液4种不同颜色标记的标准缓冲液和特定缓冲液稀释液分为A、B、C三种，依表询储藏条件在不被稀释的情况下，可长期存放在零下20度长达20之久DNA限制性内切酶严格的质量检验：非特异性的内切酶活性检测核酸酶污染检测外切酶污染检测蓝白斑筛选检测DNA限制性内切酶针对于常用在克隆实验中的酶检验过量酶切对DNA末端的完整性是否有破坏NEB自主克隆的酶基因从重组菌株中提纯的酶随酶另附一管BSA酶识别位点被dam或d

3、cm甲基化后不能被切动酶是否耐热经过蓝白斑法检测目录书中出现的标志符号的含义最佳的工具酶反应温度酶所对应的缓冲液编号DNA限制性内切酶Homing核酸内切酶识别12-40碱基的长的、对称识别位点的稀有内切酶同裂酶的概念识别同一酶切位点的一组内切酶BSA的作用酶保护剂，在反应中保证酶具有最佳的活性DNA限制性内切酶小常识：NEB限制性内切酶的卖点：种类非常齐全，（丰富的稀有酶）稳定性好，存放时间长价格在进口酶类里适中质量可靠DNA限制性内切酶DNA/RNA聚合酶DNA或RNA的探针标记3’末端和5’末端的补平3’末端的碱基置换DNA测序反应、定点突变和转

4、录3’末端突出的切平特性：以单链DNA或RNA为模板，从5’端向3’端合成新链应用性能指标：5’端向3’端的外切活性3’端向5’端的外切活性聚合速度错配率耐热性延伸能力常用的种类：E.coliDNAPolymeraseIKlenowFragment（3’—5’exo-）T4DNAPolymeraseTerminalTransferaseM-MuLVReverseTranscriptase*M-MuLVReverseTranscriptase（RNaseH-）T7/Sp6RNAPolymeraseDNA/RNA聚合酶NEBVent系列聚合酶VentDNA

5、Polymerase主要应用：常规PCR扩增双脱氧法测序NEBVent系列聚合酶VentDNAPolymerase与常规Taq酶的错配率比较卖点：高保真耐热性非常好DNA/RNA修饰酶DNA/RNAModifyingEnzyme连接酶…………………………Ligase激酶……………………………Kinase碱性磷酸酶……………………PhosphataseBeta琼脂糖酶…………………Agarase甲基化酶………………………Methylase核酸酶…………………………Nuclease外切酶…………………………Exonulease内切酶…………………………En

6、donuleaserecA重组蛋白酶………………recAProteinDNA/RNA修饰酶重点产品：T4DNALigase单位定义：20000NEBUnit=300WeissUnit4000NEBUnit=60WeissUnitT4PolynucleotideKinase（T4PNK）对DNA5’末端进行磷酸化，用于探针标记或克隆AlkalinePhosphatase,CalfIntesinal（CIP）去除DNA5‘和3’的磷酸基团，用于制备5‘的置换标记和载体克隆，阻止载体的自我连接。分子量标准DNA分子量标准常用类型：整数分子量的Marker1k

7、bDNALadder2-logDNALadder100bpDNALadderNEW噬菌体DNA和质粒DNA酶消化型的DNA分子量标准非整数型的DNA分子量标准DNA分子量标准PGF分子量标准DNA被包埋在凝胶中，以注射器的形式包装用于几十kb至上千kb的DNA分离时的Marker脉冲电泳分离分子量种类：LowRangeMidRangeLambdaLadderYeastChromosomeRNA分子量标准适用于普通凝胶或变性胶条带为整数的分子量RNA分子量标准蛋白分子量标准蛋白分子量标准普通型…………2-212kDa（精确）预染型…………6-175kDa

8、（估计）HRP蛋白Marker检测包6.5-165kDa（Biotin标记，BiotinAb）