生物选修一 DNA的粗提取与鉴定.ppt

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1、DNA粗提取与鉴定1、鸡血细胞做实验材料，一是因为鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀破。2、预冷的乙醇溶液具有以下优点：一是抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解，二是降低分子运动，易于形成沉淀析出，三是低温有利于增加DNA分子柔韧性，减少断裂；注意：根据以上原理可设计提取和纯化DNA的方案：方案一：30mL含DNA的滤液＋2mol/LNaCl→同方向搅拌，DNA溶解→加入蒸馏水→DNA析出→过滤得到过滤物→放到2mol/LNaCl溶液中溶解→DNA-NaCl溶解液方案二：30mL滤液＋嫩肉粉（木瓜蛋白酶）→静置10～15分钟→DNA滤液方案三：30mL滤液→60～75

2、℃恒温保温10~15分钟→过滤获得DNA滤液两种材料的DNA粗提取与鉴定过程以鸡血为材料以花菜为材料①释放组织细胞中的DNA，②粗提取DNA，③将粗提取的DNA进一步纯化，④鉴定提取物是DNA鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图2mol/L鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图5、过滤→取纱布上的滤物纱布过滤6、再次溶解DNA2mol/LNaCl溶液取滤物鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图7、加冷酒精使DNA析出（纯化）冷酒精鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图DNA的鉴定鸡血细胞植物组织１.0.1g/ml的柠檬酸钠溶液,按1:2的比例与新鲜鸡血混合搅拌均匀。２.将血液置于冰箱中24小时,弃

3、上部澄清液３.取烧杯中的血细胞液约5~10ml加入到100ml烧杯中，向烧杯中加入20ml蒸馏水，用玻棒沿一个方向快速搅拌5分钟，加速血细胞在低渗溶液中的破裂４.将2mol/L的氯化钠溶液50ml缓缓倒入烧杯中，用玻棒沿一个方向搅拌，使DNA溶解于氯化钠溶液中，滤除杂质，获得粘稠状的鸡血细胞DNA提取液５.将鸡血细胞DNA提取液置于较大的烧杯中，沿烧杯内壁缓缓倒入蒸馏水，并不断搅拌，直到粘稠状DNA不再析出为止。用玻棒搅拌，使析出的DNA缠绕于玻棒末端。６.将析出的DNA再溶解于2mol/L的氯化钠溶液中。７.在DNA的氯化钠溶液中倒入95%的酒精50ml（冷却过的酒精效果较好），使DNA再

4、次析出，用玻棒搅拌，使DNA再次缠绕于玻棒末端。８.DNA的鉴定：取两支试管，各加入2ml0.015氯化钠溶液，将DNA溶解于其中一支试管中，另一支做为对照组。然后，在两支试管内加等量的二苯胺试剂，水浴加热10min左右，冷却，观察实验现象。１.取新鲜植物组织（菜花）放置于冰箱中冷却1~2天２.取30克植物组织,切碎,置于研体中,倒入适量洗洁精,加入适量的NaCl,充分研磨10分钟３.过滤研磨液，取上清夜置于冰箱中冷却几分钟４.取1倍体积的上清液，加入2倍体积的95%的冷酒精当中，用玻棒轻轻搅拌，沉淀3~5分钟后可见白色絮状DNA缠绕于玻棒末端。５.DNA的提纯同鸡血细胞为实验材料的实验操作

5、步骤6、7，具体数据有一定的差异。６.鉴定DNA的粗提取与鉴定实验原理DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同DNA和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不同DNA与二苯胺呈现蓝色反应DNA粗提取选择适宜材料破碎细胞DNA的溶解和析出DNA的纯化鉴定DNA与二苯胺混合，沸水浴，呈现蓝色反应总结：1.下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是A．氯化钠的浓度越低，对DNA的溶解度越大B．人血也可代替鸡血进行实验C．柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂D．DNA不能溶于酒精2.在破碎鸡血细胞时，要先加入20ml的蒸馏水，其作用是A.DNA溶解于水B．血细胞破裂，DNA

6、释放C．稀释血液，防止凝固D．有利于搅拌3.若选择的实验材料为植物细胞，破碎细胞时要加入一定量的洗涤剂和食盐，加入食盐的目的是A.利于DNA的溶解B.分离DNA和蛋白质C.溶解细胞膜D.溶解蛋白质4.在DNA粗提取实验中，向在溶解DNA的NaCl溶液中，不断加入蒸馏水的目的是A．有利于溶解DNAB．有利于溶解杂质C．减少DNA的溶解度D．减少杂质的溶解度