生物DNA的粗提取与鉴定

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1、DNA的粗提取与鉴定器材：铁架台、铁环、银子、三角架、酒精灯、石棉网、载玻片、玻璃棒、滤纸、滴管、量筒、烧杯、试管、漏斗、试管夹、纱布试剂：95%酒精.蒸馅水、质量分数为O.lg/ml的柠檬酸钠、2mol/L和0.015mol/L的NacI、二苯胺材料：鸡血细胞实验步骤:实验前需要制备鸡血细胞：取质量浓度为O.lg/ml的柠檬酸钠溶液100ml,置于500ml烧杯中。将宰杀活鸡流出的鸡血（约180ml）注入烧杯中，同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶液充分混合,以免凝血。然后，将血液倒入离心管内，用1000r/min的离心机离心2min,此时血细胞沉淀于离心管底部。实验时，用吸管

2、除去离心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞溶液。（如没有离心机，可以将烧杯中的血液置于冰箱内，静置一天，使血细胞自行沉淀。）1、提取鸡血细胞的细胞核物质将制备好的鸡血细胞液5〜10ml,注入到50ml烧杯中。向烧杯中加入蒸馅水20ml,同时用玻璃棒沿一个方向快速搅拌5min,使血细胞加速破裂。然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至1000ml的烧杯中，取其滤液。2、溶解细胞核内的DNA将物质的量浓度为2mol/L的Nacl40ml加入到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌lmim使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态。3、析出含DNA的黏稠物沿烧杯内壁缓缓加入蒸憾水，同时用玻璃棒

3、沿一个方向不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馅水，溶液中出现的黏稠物会越来越多。当黏稠物不再增加时停止加入蒸馅水。（这时溶液中Nacl的物质的量浓度相当于0.14mol/Lo)4、滤取含DNA的黏稠物用放有多层纱布的漏斗，过滤步骤3中的溶液至1000ml的烧杯中，含DNA的黏稠物被在纱布中。5、将DNA的黏稠物再溶解取一个50ml烧杯，向烧杯内注入物质的量浓度为2mol/L的Nacl溶液20ml。用钝头银子将纱布上的黏稠物夹至Nad溶液中，用玻璃棒沿一个方向不停地搅拌3min,使黏稠物尽可能多地溶解于溶液中。6、过滤含有DNA的Nad溶液

4、取一个100ml烧杯，用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5中的溶液。取其滤液，DNA溶于滤液中。7.提取含杂质较少的DNA在上述滤过的溶液中加入冷却的、体积分数为95%的酒精溶液50ml（使用冷却的酒精，对DNA的凝集效果较佳），并用玻璃棒沿一个方向搅拌，溶液中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。这种丝状物的主要成分就是DNAO注意观察丝状物是什么颜色的。8、DNA的鉴定取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为0・015moI/L的Nacl溶液5ml,将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4ml的二苯胺试剂

5、。混合后，将试管置于沸水中加热5min,待试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化。