孢子发芽率测定法).doc

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1、本方法适用于酿造酱油时在制品菌种孢子发芽率的测定。1仪器及试剂a.凹玻片、盖玻片、显微镜;b.恒温箱;c.生理盐水、无菌水、察氏培养基;d.接种环、酒精灯等。2操作2.1制备悬浮液:取种曲少许入盛有25mL事先灭菌的生理盐水和玻璃珠的锥形瓶中,充分振摇约15min,务使孢子个个分散,制成孢子悬浮液。2.2制作标本:先在凹玻片的凹窝内滴入无菌水1滴,再将察氏培养基融化并冷却至45～50℃后,接入孢子悬浮液数滴。充分摇匀后,用玻璃棒以薄层涂布在盖玻片上,然后反盖于凹玻片的窝上,四周涂凡士林封固。放置于30～32℃恒温箱内培养3～5h。2.3镜检:取出标本在高倍镜头下观察孢

2、子发芽情况,逐个数出发芽孢子数和未发芽孢子数3计算　　　　　　　　　　　a　　　　　发芽率(%)＝━━×100　　　　　　　　　　　A式中:a--发芽孢子数,个;A--发芽及不发芽孢子总数,个。4注意事项4.1为了正确起见,要同时制作两张以上标本片镜检,取其平均值。4.2悬浮液制备后要立刻制作标本培养,时间不宜放长。4.3培养基中接入悬浮液的数量,应根据视野内孢子数多少来决定,一般以每视野内有10～20个孢子为宜。4.4每次镜检,要在不同视野中连续观察100～200个孢子的发芽情况。4.5由于发芽快慢与温度有密切关系,所以培养温度要严格控制。为了加速发芽,可提高培养温

3、度至35℃左右,但必须与30～32℃法进行对照。4.6菌种不同,驯化程度不同,测定用培养基配方允许稍有不同,例如3.951菌种可在察氏培养基中加几滴豆饼煮出液。4.7察氏培养基配方如下:硝酸钠3g磷酸氢二钾1g氯化钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g蔗糖20g蒸馏水1000mL琼脂20g将上述药品按顺序溶解后,加入琼脂加热溶化。分装15×150mL试管中,加压灭菌后备用。