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1、中华人民共和国专业标准孢子数测定法SB/T10315-1999Enumerationofspore━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━本方法适用于酿造酱油半成品—菌种的孢子数测定。1仪器与试剂a.显微镜、血球计数板、盖片;b.95%酒精、稀硫酸(1∶10);c.平天:感量0.001g。2操作方法2.1样品稀释:精确称取种曲或二级菌种1g(称淮至0.002g),倒入盛有玻璃珠的250mL锥形瓶内,加95%酒精5mL,加无菌水20mL,加稀硫酸10mL,充分振摇,使
2、分生孢子个个分散,然后用多层纱布过滤、冲洗,务使滤渣不含孢子,稀释至500mL。2.2制片:取稀释液1滴,滴于血球计数板的计算格上,然后将盖片轻轻由一边向另一边压下,使盖片与计数板完全密合,液中无气泡,用滤纸吸干多余的溢出悬浮孢子液,静置数分钟,待孢子沉降。2.3观察计数:用低倍镜头或高倍镜头观察。由于稀释液中的孢子,在血球计数板上处于不同的空间位置,要在不同的焦距下才能看到,因而计数时必须逐格调动微细螺旋,才能不使遗漏。孢子常位于大格的划线上,应一律取二边计数,而弃另二边,以减少误差。使用16×25的
3、计数板时,只计板上四个角上的4个大格(即100个小格)。如果使用25×16的计数板,除计四个角的4个大格外,还需要计中央一大格的数目(即80个小格)。每个样品重复观察计数不少于2次,然后取其平均值。即为该样品种曲的孢子数。3计算3.116×25的计数板nV孢子数（个／克）=━━×400×10000×━━━100GnV=4×10**4×━━……………………………(1)G式中:n——100小格内孢子总数,个;V——孢子稀释液体积,mL;G——样品重量,g。3.225×16的计数板nV孢子数（个／克）=━━×
4、400×10000×━━━80GnV=5×10**4×━━……………………………(2)G式中:n——80小格内孢子总数,个;V——孢子稀释液体积,mL;G——样品重量,g。4注意事项4.1称样要尽量防止孢子的飞扬。4.2测定时,如果发现有许多孢子结集成团或成堆,说明样品稀释未能符合操作要求。因此必须重新称重、振摇、稀释。4.3生产实践中应用时,种曲以干物质计算。因而需要同时测定种曲水分,计算时样品重量则改为绝干重量。样品绝干重量＝G(1-W)…………………………………(3)式中:G——样品重,g;W——
5、样品水分的百分比含量,%。━━━━━━━━━附加说明:本标准由商业部副食品局提出。本标准由上海市酿造科学研究所起草。本标准主要起草人须凤高。━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━中华人民共和国商业部1987-11-20批准1988-07-01实施
