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1、兔骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的实验研究作者：姜敏辉，王卫彪，曹京燕【摘要】目的：探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)移植对兔心肌梗死(myoeardialinfarction,MI)的治疗作用。方法:大耳白兔38只，2只用于提供MSCs,余36只随机分为对照组、MT组和MSCs移植组。采用结扎左冠状动脉前降支方法制作MI模型,在MI后1小时将DAPI标记的MSCs移植至梗死区,对照组注射等量PBS。术前、术后2周、4周分别做超声心动图检查其心功能变化。术示4周处死兔，取心槌区组织进行组织学观察。结果：心梗4周后，
2、MSCs组心肌组织冷冻切片中可以观察到DAPI标记细胞存在。MSCs组心功能和毛细血管密度与MI组比较差异均有统计学意义(P【关键词】心肌梗死骨髓间充质干细胞移植兔[Abstract]Objective:Toinvestigatetheeffectsofmesenchymalstemcells(MSCs)transplantationonthetherapyofmyocardialinfaretion(MI)inrabbits.Methods:36rabbitswererandomlydividedintothreegroups:thecontrolgro
3、up,theMIgroup,theMSCsgroup.MIwasinducedbyligationofleftanteriordescendingbranchofthecoronaryartery.TheMSCslabeledbyDAPIweretransplontedafterMI1h.Echocarciiographywasperformedtoevaluatethecardiacfunctionbeforeoperationand2weeksand4weeksafterMI.Afterfourweeks,specimenswereharvestodf
4、romthetransplantedareasandobservedhistologically.ResuIts:FourweeksafterAMI,thelabeledcellswereviableintherecipientheart.IncontrastwiththeMIgroup,theheartfunctionandvasculardensityoftheMSCsgrouphadsignificantclifferenee(P[Keywords]Myocardialinfarction；Mesenchymalstemcell；Transplant
5、ation：Rabbit心肌梗死后心衰的根木原因在于心肌细胞的数量减少。细胞心肌成形术是近年来发展起来的一项有广泛应用前景的治疗方法，目前有许多学者致力于此方面的研究[1]。骨箭MSCs是一种多潜能分化干细胞，能分化成心肌细胞⑵,由于取材方便,来自自体,无排斥反丿应、无伦理问题、扩增能力强等优点，是H前细胞移植较理想的靶细胞。木实验拟探讨骨髓MSCs移植治疗兔MI的疗效及其机制。1材料与方法1.1试剂DMEM-LG培养基(Gibco公司)；胎牛血清(Gibco公司)；percoll细胞分离液(密度为1.077g/ml,Pharmacia公司);5-氮胞(5
6、-azacyticline,5-aza)(Sigma公司)；DAPI(Roche公司)；彩色B超机SEQUIA512,超声频率7.0MHz；透射电子显微镜(日本JEOL公司,JEM-1230型)等。1.2动物及分组大耳白兔38只，体重2.0〜2.5kg,由南通大学实验动物屮心提供。2只用于提供MSCs,余36只随机分为3组,每组10只;(1)对照组冠状动脉下穿线,不结扎,心肌内注射PBS液;（2）心肌梗死组（MI组）制成MI模型，心肌内注射等量PBS液；（3）MSCs移植组（MSCs组）制成MI模型,心肌内注射等量含MSCs的PBS液。1.2方法1.3.1
7、兔MSCs的分离及培养无菌条件下进行兔骼后上棘穿刺抽取骨髓，加肝索抗凝。应用percoll细胞分离液离心提取MSCs,用含10%胎牛血清的DMEM-LG进行培养。37°C、5%C02条件下培养,2天后首次换液，贴壁细胞达到约80%融合时用胰蛋白酶消化,按］：2进行传代培养。通过不断的换液及传代纯化扩增MSCs。P3用流式细胞仪检测鉴定。3.2MSCs的诱导分化及鉴定P3第4夭用10umol/L5-aza进行诱导24小时，再用原培养基继续培养4周，期间酌情延迟换液，不予传代。4周后，通过RT-PCR检测5-aza诱导4周和未诱导MSCs的P-MHC、cTnl
8、的表达。将诱导4周的MSCs用4%戊二醛固定后,送至电镜室检测。2
