质谱检测器的调谐和校正.pdf

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1、质谱检测器的调谐和校正本章概要本章概要●调谐
调谐的准备工作
优化调谐参数●校正
校正的准备工作
执行校正
复查校正数据
重新校正调谐调谐●要调谐的原因：
通过优化质谱峰的强度增加灵敏度
得到接近高斯分布的峰型(得到准确的质量分配)
优化谱峰的分辨率调谐前的准备调谐前的准备●导入样品，寻找最佳采集参数：
通过注射泵输送样品◗用样品充满注射器◗选择流速3-10uL/min
‘T’型接口动态加样技术◗用样品充满注射器◗寻找适宜的LC流速和流动相的比例，获得最佳的数据采集条件◗动态条件下导入样品，观察“好”的信号调谐过

2、程中应注意的参数调谐过程中应注意的参数●探头位置调整●去溶剂气的流量●离子源的温度●去溶剂气的温度(electrosprayonly)●APCI探头温度(APCIonly)●喷雾毛细管电压(electrosprayonly)●电晕放电针电压(APCIonly)●取样锥孔电压●萃取锥孔电压●射频六极杆透镜电压●离子能量●低质量端和高质量端的分辨率调谐窗口(离子源参数)这些参数影响灵敏度和信号稳定性调整去溶剂气体的流量调谐窗口(质量分析器参数)这些参数影响峰形和分辨率调谐窗口调谐窗口调谐过程中,可实时检测四段质量范围

3、,得到全程满意的参数APIAPI的雾化气体的雾化气体●ESI和APCI均采用与电离源同轴的氮气气流●ESI：产生汽溶胶的溶液小液滴●APCI：LC流动相经APCI加热器快速加热而形成蒸汽●雾化气：固定流速无需调整●流速参数通过调节90-100psi的管路,氮气得到已经优化的流速去溶剂气去溶剂气●与喷嘴加热器同轴的氮气气流●可以通过仪器面板前的旋钮调整大小●根据流动相的比例和流速大小优化●ESI，去溶剂气可以加热以提高溶剂的蒸发●APCI,无需加热●保护离子源，无论是ESI还是APCI，如果流速小于100L/H，软

4、件会自动关闭所有加热器离子源和去溶剂气的温度离子源和去溶剂气的温度●加热用于帮助溶剂蒸发●根据流动相的比例和流速大小优化参数，高含水比例的流动相需要更高的温度●温度太低时易形成溶剂簇离子●APCI电离方式不使用去溶剂气加热器LC流速,uL/min源温度,°C去溶剂气温度,°C<10080-100100-350100-250100-130350-400250-1000130-150400-450APcIAPcI探头温度探头温度●高温加热溶剂和样品(300-600℃)●如果温度设置太高，对于热不稳定样品可能引起热裂解

5、●根据被分析物的挥发性、流动相比例以及流速大小等因素优化温度，高含水比例的流动相需要更高的温度ESIESI毛细管喷口电离电压毛细管喷口电离电压●内径约75-μm的不锈钢毛细管导入流动相和样品质谱的离子源●提供电离途径●正离子电离：2-4kV●负离子电离：2-3kV●影响信号的稳定性APcIAPcI电晕放电针电压电晕放电针电压●化学电离技术●正离子电离：3-5kV●负离子电离：2-4kV取样锥孔电压取样锥孔电压●提取离子进入第一级真空区●常用范围25-70V●低分子量的化合物使用较低的电压●高分子量的化合物使用较高

6、的电压(>1000Da)●提高电压会产生碎片(源内CID)萃取锥孔电压萃取锥孔电压●将离子聚焦到RF六极杆透镜●通常范围3-10V●提高电压可以产生碎片●一般建议用提高取样锥孔电压的方式来得到碎片RFRF六极杆透镜电压六极杆透镜电压●将离子聚焦到四极杆的中心●通常使用优化好的0.5v直流偏置电压●RF电压采用与四极杆同步的扫描离子能量离子能量●加在四极杆预过滤器处的直流偏置电压●通常范围-1~+3V●提高离子能量会降低分辨率●在不降低信号强度的条件下，此值越低越好●如果此值设置低于-1V，而没有影响信号强度，此时

7、应该清洗离子源质量低端和质量高端的分辨率质量低端和质量高端的分辨率●对峰形均产生影响●通常设置15(任意单位),对两端得到单位质量分辨率●优化其他参数时一般先降低分辨率设置，比如11，调好后，再提高此值至你所期望的分辨率校正校正●为什么
校正质量标尺
在安装期间的质量校正，可以对硬件提供更精细的校正准备校正准备校正●导入标准参照物溶液
用注射泵将标准参照物溶液（如聚乙二醇，NaCsI等）导入MS◗注射器抽满参照物溶液◗通过毛细管连接ESI电离探头◗3-10uL/min
为避免离子源污染，不要长时间导入参照物溶液准

8、备校正准备校正●调谐
开始校正前，用参照物溶液调整离子源参数◗设置倍增器电压650V◗调整离子源参数，得到最优化的离子强度和峰形◗设置合适的分辨率和离子能量达到单位质量分辨率
在整个校正范围内得到一个好的质量峰分布◗检查标样中m/z大于500amu峰强度◗同样也要检查m/z89和133信号强度(对于PEG碎片-强度随锥孔电压的升高而变强)准备校正准备校正准备校正准备校正●