EV71感染手足口病患儿Th细胞免疫变化及其意义.doc

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1、EV71感染手足口病患儿Th细胞免疫变化及其意义［摘要］目的探讨EV71感染手足口病患儿Th细胞免疫平衡变化及其对疾病进展的影响。方法选择84例手足口病患儿分为普通组和重症组，另选择30例健康儿童作为对照，采用流式细胞技术检测静脉血Thl/Th2细胞表达水平变化，采用酶联免疫吸附法检测血清IL-4及IFN-Y表达水平变化。结果重症组及普通组患儿静脉血Thl及Thl/Th2表达水平低于对照组，Th2高于对照组，IL-4及IFN-Y表达水平低于对照组。重症组Thl及Thl/Th2表达水平低于普通组，Th2高于普通组，IL-4及IFN-Y表达

2、水平低于普通组。结论EV71感染手足口病患儿Th细胞免疫异常，可能同手足口病患儿的发病及疾病进展有关。［关键词］手足口病；肠道病毒71；Th细胞免疫；白细胞介素4；Y干扰素［中图分类号］R725.1［文献标识码］B［文章编号］1673-9701(2012)32-0077-02手足口病是学龄前儿童常见传染性疾病，尤其以婴幼儿高发，手足口病以手、足及口部位的皮损为最常见的临床表现，严重者可导致患儿的多器官功能损害甚至功能衰竭而致患儿临床死亡。手足口病是由病毒感染引起的传染性疾病，其中以EV71病毒及CoxA16病毒感染最为常见。近年来的研究

3、显示[1],手足口病患儿在发病过程中，存在免疫功能失调的状态，患儿体内的细胞免疫及体液免疫均存在不同程度的异常，并且与疾病的进展有关。本文对EV71病毒感染所致的手足口病患儿Th细胞免疫平衡变化及其对疾病进展的影响进行研究。现报道如下：1资料与方法1.1临床资料选择2010年10月〜2012年4月我院收治的手足口病患儿84例，均经PCR诊断为EV71病毒感染所致手足口病，其中男49例，女35例，年龄0.4〜9.2岁，平均（2.9±2,4）岁，患儿按卫生部医政司发布的《手足口病诊疗指南（2010）》[2]分为普通型52例及重症型32例；另

4、选择30名健康幼儿作为对照组，其中男18例，女12例，年龄1〜8岁，平均（2.8土1.7）岁。患儿同对照组儿童的年龄、性别经统计学分析差异无统计学意义，具有可比性。1.2主要仪器及试剂流式细胞仪（美国BD公司），721型分光光度计（北京仪器厂），CD3+、CD4+及CD8+抗体（美国BD公司），IL-4、IFN-V检测试剂盒（南京建成生物工程研究所）,IL-4抗体和IFN-Y抗体（武汉波士德生物试剂公司）。1.3标本采集及检测1.3.1Th细胞检测患儿清晨抽取空腹静脉血，加入枸椽酸钠抗凝，PBS缓冲液调整细胞密度为1X106/L,室温暗

5、处孵育30min,每管加入500uL溶血素裂解红细胞，静置20min采用PBS缓冲液洗涤，500G/min离心5min,加入PBS缓冲液洗涤后上机检测，采用CD3+抗体标记T细胞，采用CD4+抗体区分Th细胞亚群,IFN-Y和IL-4抗体筛选Thl、Th2细胞。检测完毕后采用Cellquestpro软件进行分析。1.3.2IL-4、IFN-Y表达检测患儿静脉血低温分离血清，100uL标准品梯度稀释，绘制标准曲线，100uL样品加入96孔板各反应孔，37£温育60min,PBS缓冲液冲洗，加入XBiotin混匀后37°C温育60min,加

6、入XHRP充分反应，TMB显色液，37°C温育15min,H2S04终止反应，ELISA检测试剂盒测定IL-4、IFN-y水平,分别于450nm处检测吸光度，依据标准曲线计算IL-4、IFN-y浓度。1.4统计学方法数据采用SPSS17.0统计学软件进行分析，计量资料以(x±s)表示，采用方差分析，组间比较采用t检验，检验水准a=0.05,P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1各组静脉血Thl/Th2表达水平变化重症组及普通组患儿静脉血Thl及Thl/Th2表达水平低于对照组，Th2高于对照组，重症组Thl及Thl/Th2低于普通

7、组，Th2髙于普通组。见表k2.2各组静脉血IL-4、IFN-Y表达水平变化重症组及普通组患儿血清IL-4及IFN-Y表达水平低于对照组。重症组患儿血清IL-4及IFN-Y表达水平低于普通组。见表2。3讨论手足口病是儿童常见传染性疾病，以手、足部及口腔黏膜溃疡为主要的临床表现，严重者可引起循环系统、肺部及脑部等多系统损害而导致患儿临床死亡。病毒感染是手足口病的致病原因，其中EV71病毒是主要的致病病毒之一。近年来的研究结果显示[3],病毒感染能够导致患儿的免疫系统功能失调，T淋巴细胞免疫在肠道病毒感染后能够发生免疫调节作用，并且参与疾病

8、的进展，手足口病患儿的T淋巴细胞的数量及肿瘤均发生明显变化，导致T淋巴细胞的免疫功能失衡，而且小儿的免疫系统发育尚不完善，T淋巴细胞免疫的紊乱可能导致患儿的疾病进展。本研究发现，手足口病患儿的Thl表达水平