细胞工程实验指导-重庆邮电大学主页.doc

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1、细胞工程实验指导  62/62目录实验室安全守则3实验操作须知5实验一培养基母液的制备8实验二培养基的配制与灭菌12实验三培养材料灭菌和接种16实验四愈伤组织的诱导与增殖19实验五愈伤组织的分化21实验六植物细胞悬浮培养与同步化22实验七细胞微室培养23实验八原生质体培养24实验九烟草原生质体融合26实验十烟草叶片组织培养28实验十一月季组织培养29实验十二菊花组织培养与快速繁殖30实验十三马铃薯茎尖脱毒32实验十四马铃薯试管微薯的诱导33实验十五小麦幼胚培养34实验十六小麦成熟胚培养36实验十七小麦花药培养38实验十八生物反应器中芹菜体胚发生的大规模培养39实验十九

2、植物细胞的生长计量技术41实验二十烟草遗传转化实验45实验二十一细胞原代培养46实验二十二细胞传代培养48实验二十三细胞的冻存和复苏49实验二十四细胞的分裂指数51实验二十五细胞周期的测定5262/62实验室安全守则一般规定1、上课第一天请先熟悉环境，察看紧急冲洗站、洗眼站、灭火器、急救箱及安全梯等的位置，牢记“安全”是进行任何实验最重要的准则。2、在实验室內请穿着实验服，避免穿凉鞋、拖鞋。留有长发者，戴帽套将头发捲入套內，或以橡皮筋束于后，以防止引火危险或污染实验。3、在实验室内禁止吸烟、饮食、化妆、嚼口香糖、嬉戏奔跑，食物饮料勿存放于实验室的冰箱中，实验桌上勿堆放

3、书包、书籍、衣服及杂物等。4、所有实验仪器、耗材、药品等均属实验室所有，不得带出实验室。每组分配的仪器、耗材请确定清点与保管，课程结束后如数清点缴回。公用仪器请善加爱惜使用，实验前后，请把工作区域清理擦拭，并随时保持环境卫生。5、实验前详阅实验内容，了解实验细节的原理及操作规程，注意上课所告知的注意事项。实验进行中有任何状况或疑问，随时发问，切勿私自变更实验程序。打翻任何药品试剂及器皿时，请随即清理。实验后，确切记下自己的结果，严禁抄袭，确定关闭不用的电源、水、酒精灯及煤气等。6、睡眠不足、精神不济或注意力无法集中，请立即停止实验。实验时间若延长，请注意时间的管制及自

4、身的安全，不可自行逗留实验室过夜。7、实验完毕，请清理实验室、倒垃圾、灭菌、关闭灯光及电源，离开实验室前记得洗手。8、任何意外事件应立即报告师长，并应熟知相关的应急措施。药品1、使用任何药品，请先看清楚标示、注意事项，翻阅物质安全资料表，查明是否对人体造成伤害，使用完毕请放回原位。2、新配制的试剂请清楚注明内溶物、浓度、注意事事项及配制日期，为避免污染，勿将未用完的药剂倒回容器内。3、挥发性、腐蚀性、有毒溶剂（如甲醇、丙酮、醋酸、氯仿、盐酸、硫酸、b-mercaptoethanol、酚等）要在通风橱中戴手套量取配制，取用完后随即盖好盖子，若不小心打翻试剂，马上处理。4

5、、有毒、致癌药剂例如acrylamide（神经毒）、ethidiumbromide（突变剂）、SDS、秋水仙素请戴手套及口罩取用，并勿到处污染，脱下手套后，应养成洗手的好习惯。5、接触到病原材料或细菌，应迅速消毒。所有被污染的物品，在丢弃或重复使用前均需先灭菌，固体培养基不得倒入水槽或下水道中。6、使用刻度吸管取物时，切勿用嘴吸取，请用自动吸管或安全吸球。仪器1、使用仪器前先了解其性能、配置及正确操作方法，零件及附件严禁拆卸，勿私自调整，并注意插座电压（110V或220V）之类别。2、使用离心机时，离心管要两两对称、重量平衡，锁紧离心机转陀。冷冻离心机于开机状态时，务

6、必盖紧盖子，以保持离心槽之低温并避免结霜。3、实验时不要用潮湿有汗的手去操作电器，不要用手紧握可能荷电的电器，不应以两手同时触及电器，电器设备外壳均应接地。万一不慎发生触电事故，应立即切断电源开关，对触电者采取急救措施。4、使用微波炉加热时，不可有铝箔等金属物品，瓶盖必须松开，以免爆炸。加热后戴防热手套取出瓶子。5、使用UV灯时，不要以眼睛直视UV，应隔着挡板观察，完毕立即关灯。6、超净工作台內的酒精有机溶剂及易燃物（如甲醇、乙醇、乙醚、瓦斯等）要远离火苗，不可留置火焰燃烧，万一着火，应力持镇定，沉着处理。酒精或乙醚等着火时，应使用泡沫灭火剂或湿毛巾覆盖，勿使用水冲洗

7、。7、使用震荡器震荡培养时，注意三角瓶务必对称放置，并用橡皮筋等夹紧，勿使其摇晃摔出台面，否则需拆开并清除玻璃碎片与培养液。62/62急救措施1、急性呼吸系统中毒：应使中毒者迅速离开现场，移到通风良好的地方，呼吸新鲜空气。如有休克、虚脱或心肺机能不全，必须先作抗休克处理，如人工呼吸、给予氧气、喝兴奋剂（如浓茶，咖啡）等。2、经由口服而中毒：需立即用3-5%小苏打溶液或1：5000高锰酸钾溶液洗胃，洗胃时要大量地喝，边喝边使之呕吐，最简单的催吐办法是用手指或筷子压舌根，或给中毒者喝少量（15-25毫升）1%硫酸铜或硫酸锌溶液（催吐剂）。使之迅速将毒物吐