植物细胞工程实验指导

《植物细胞工程实验指导》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、实验一植物组织培养培养基的配制【实验目的】通过实验，掌握常用MS培养基的配制。【仪器及试剂】1.仪器：：500ml试剂瓶4个,100ml试剂瓶4个，高压灭菌锅,电子天平，烧杯（大、中、小各2个），玻璃棒，移液管，搪瓷缸，培养瓶，电炉，pH计或精密pH试纸，容量瓶（大、中、小各1个）2•试剂：见MS培养基的配制方法一览表【操作步骤】1、母液的配制：为了避免每次配制培养基时都要对所需的各种成分进行称量，人们便把培养基中必需的一些物质按原量的10倍、100倍或1000倍称量后放在一起，成为一种浓缩液，这种浓缩液就叫“母液”。%1大量元素：一般配成使用浓度的10—20倍，浓度太大的母液

2、在冰箱保存时会结晶。除钙盐外，其它大量元素按一定倍数分别称量并分别用蒸啊水溶解后混合在一起，最后加蒸啊水定容。钙盐要单独配制，不能和PO?SO?混合，以免生成Ca3（PO4）2或CaSOs发生沉淀。%1微量元素：微量元素因用量小，为称量方便及精确起见常配成100倍或1000倍的母液，即每种化合物的量加大100倍或1000倍，逐个溶解并混合在一起。%1铁盐：微量元素中的铁盐是单独配制的，由硫酸亚铁（FeSO4-7H2O）5.56克和乙二镀四乙酸二钠（Na2・EDTA）7.46克溶于1升水中配成。每配1升培养基加铁盐5毫升。%1有机物质：主要指氨基酸和维生素物质，它们都是分别称量

3、及分别用容量瓶配成所需浓度（0」一10毫克/毫升），用时按培养基配方中要求的量分别加入。这些化合物都易溶于水，直接用水配制。%1生长调节物质：一般配成0.1—1.0毫克/毫升。生长素类IAA、NAA、2,4・D等，配制时先按要求浓度称好药品,置于小烧杯中，用1—2毫升0.1N氢氧化钠溶解，再加蒸憎水稀释至所需浓度。如果用少量95%的乙醇来溶解亦可，有时效果不如氢氧化钠好。配制细胞分裂素类物质时，则宜先用少量0.5N或1N盐酸来溶解，然后加蒸馄水至所需量。2、配制培养基%1吸取各种母液，按培养基配方吸取一定量的各种母液混合在一起。大量及微量元素的母液吸取量为：母液吸取量（ml）=

4、配制培养基的数量（ml）/母液扩大倍数有机物及生长调节物质的母液吸取量为：母液吸取量（ml）=每升培养基要求的含量（mg）/每毫升母液中的含量（mg）%1称取一定量的蔗糖（或葡萄糖等），溶解后与1混合。%1称取一定量的琼脂，加蒸憾水，加热使其熔化成透明状后，和1合并。%1用热蒸憾水定容到一定体积，继续加热，不断搅拌，直至琼脂完全溶解。%1用pH计或精密pH试纸测pH值，用1N或0.1N氢氧化钠或盐酸将培养基的pH值调至5.8-6.0o%1将配好的培养基用漏斗或分装器分装到干净的培养瓶内。琼脂约在40°C时才凝固，所以有足够的时间来进行分装工作。%1用封口膜封口，并对不同的培养基

5、及时做好标记。通常培养基应在汽相120°C的条件下在高压锅内灭菌20分钟。在高压灭菌锅的加热过程中，在气压指针上升到0.5公斤/厘米彳时,放一次气，然后在温度达120°C、1.1公斤/厘米彳时，保持此压力灭菌15-20分钟。灭菌完成后，待灭菌锅的压力0降到时，打开灭菌锅，取出培养瓶，放平，待培养基凝固后备用。【注意事项】1.实验中所用的各种容器一定要洗净、烘干。1.用电子天平称量药品时，一定要用称量纸，对于有腐蚀性的药品，应将其放在小烧杯中称量。3•各种母液应保存在2—4°C的冰箱中，以免变质、长霉。4•卩引哆乙酸（IAA）受热不稳定，所以不能和培养基一起灭菌，要过滤除菌。5.

6、用高压灭菌锅时，一定要先检查一下其中的水是否合适。附：MS培养基的配制方法一览表:母液编号化合物含量（ml/L）母液吸取量（ml/L）称量（mg）配制量（ml）1NH4NO3kno3KH2PO4MgSO4・7H2O16501900170370165001900017003700500（扩大20倍）502CaCl2・2H204404400同上503ZnSO4・7H2OMnSO4・4H2OH3BO33NaMoO4・2H2OCuSO4・5H2OCoC12・6H2OKI8.622.36.20.250.0250.0250.83430111531012.51.251.2541.5500（扩

7、大100倍）104Na2-EDTAFeSO4•7H2O37.327.8746556100（扩大200倍）55盐酸硫胺素（VB（）盐酸毗哆素（VB6）甘氨酸烟酸0.40.520.5202510025500（扩大100倍）106肌纯1001000100107蔗糖3%30g8琼脂0.6-0.8%6—8g激素阿哆乙酸BA（6—节基腺嚓吟）1.01.010101001001010实验二植物叶片的脱分化和再分化培养【实验原理】分化了的植物叶片细胞往往具有全能性，在一定条件下进行离体培养，给于一定的营养与