叶酸靶向癌细胞纳米荧光探针的制备及其性能研究.pdf

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1、犬－＇ｉｌ嫂大爱ＤＡＬＩＡＮＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ硕士芽位记文ＭＡＳＴＥＲＡＬＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮ叶酸ｆｉ向癌细胞纳米焚光探针的制备及其性能研究生物化工学科专业博作者姓名韩指忌救肺贾凌云教授２０１５年６月答辩日期—＿硕士学位论文叶酸勒向癌细胞纳米焚光探针的制备及其性能研究ａｒａｏｎｎｄ－ＰｒｅｔｉａＰｒｏｅｒｔｉｅｓｏｆＦｏｌａｔｅｔａｒｅｔｅｄＣａｎｃｅｒｐｐｇＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅＮａｎｏｐｒｏｂｅ作者姓名：韩博学科、专业：生物化工学号：２

2、１２１８１２６指导教师：贾凌云教授完成日期：２０１５年４月大理工大旁ＤａｌｉａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ大连理工大学学位论文独创性声明作者郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除文中巳经注明引用内容和致谢的地方外，本论文不包含其他个人或集体巳经发表的研究成果，也不包含其他已申请学位或其他用途使用过的成果一。与我同工作的同志对本研究所做的贡献均巳在论文中做了明确的说明并表示了谢意。若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。学位论文题目：叶酸觀向癌细胞纳米荧光探针的制备

3、及其性能研究＇作者签名：日期：年么月日＿ｔｋ—大连理工大学硕士学位论文摘要￣粒径在１００２００ｎｍ的纳米粒子具有良好的增强性渗透及滞留（ＥｎｈａｎｃｅｄｅｒｍｅａｔｉｏｎｐａｎｄｒｅｔｅｎｔｉｏｎｅｆｅｃｔＥＰＲ、，）效应，有望解决目前癌症检测准确率低边缘不清的问题，己成为癌症勒向检测定位和治疗的研究热点。研宄表明，具有良好水溶性和相容性的右旋一￣２００ｎｍ的纳米粒子糖酐可以通过自组装的方法，但在此基础上进，获得粒径在１００步添加叶酸（Ｆｏｌｉｃａｃｉｄ，ＦＡ）作为ＩＥ向分子，通过主动ＩＥ向与被动ＩＥ向结合以提高粒子ＩＥ向作用从而

4、实现癌症检测定位的研宄非常少。本论文通过自组装的方式，制备以叶酸￣－１ＤＣＡ－ＦＩＦＡ为紀向分子００２００ｎｍ的右旋糖酐粒子（Ｄｅｘ／ＮＰｓ），、焚光标记的粒径为使其作为纳米癌细胞探针以实现主动ＩＥ向与被动ＩＥ向的结合检测并对其性能进行研宄。研究内容包括以下几个方面：１．利用疏水的脱氧胆酸（Ｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃａｃｉｄ，ＤＣＡ）对右旋糖酐进行修饰，利用自组装的方法，并通过对初始浓度及去离子水滴加速度的优化，制得直径峰值１６７．５ｎｍ且分布均一的脱氧胆酸修饰的右旋糖酐纳米粒子。但粒子的稳定性并不理想，需进行改进。？２－．在ＤｅｘＤＣＡ的基础上增加氨基，

5、通过自组装的方法，制得多种粒径在１００２００－－ＮＰｓｎｍ的氨基化脱氧胆酸修饰右旋糖肝纳米粒子（ＤｅｘＤＣＡＮＨ２）。由于氨基的静电排斥作用ｅｘ－－ｓ，ＤＤＣＡＮＨ２ＮＰ在溶液中的稳定性大幅提高，可以存放１５天以上且在细？胞培养液中４ｈ内粒径仍在１００２００ｎｍ。－ｅｘ－ｏｒｅｓｃｅ３．在ＤＤＣＡＮＨ２的基础上修饰异硫氰酸荧光素（Ｆｌｕｉｎｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ，ＦＩＴＣ）作为荧光标记物、叶酸作为朝向分子，通过自组装的方法，制得三种具有焚光且粒径在－（－－１００２００ｎｍ的叶酸紀向ＦＩＴＣ标记的脱氧胆酸修饰右旋糖酐纳米粒子ＤｅｘＤＣＡＦＩ／ＦＡ

6、ＮＰｓ），三种纳米粒子在溶液中的稳定性良好，可以存放１４天以上，在细胞培养液中４ｈ内粒径仍２００ｎｍ左右。２。－－－４ＤＣＡ－ＦＩ．ＤｅｘＦＩ０ＦＡＮＰｓ（上标表示ＤｅｘＤＣＡＩＴＣ和氨基的投料比．５／０．５合成时Ｆ，－－－下标分别表示ＤｅｘＤＣＡ－ＦＩＴＣ和ＤｅｘＤＣＡＦＡ的含量）对叶酸受体（ＦＲ）过量表达的一５－－ＦＲ（＋）组和ＦＲ表达量较少的ＦＲ（）组癌细胞具有ｅｘＤＣＡ－ＦＩ定的区分能力．ＦＡ；Ｄ％７５／ＦＲ＋ＦＲ（－癌细胞具有明显的区分能力０．２５ＮＰＳ对（）组和）组，满足检测要求。且两种－纳米粒子在浓度较低时对ＭＣＦ７细胞、Ｈｅｌａ细胞、

7、Ａ５４９细胞的细胞毒性都很小，并都一具有良好的血液相容性，有望进步进行动物体内实验或通过改变标记物或祀向分子进行性能的改良。关键词：癌细胞乾向检测；纳米粒子；叶酸；荧光－－Ｉ叶酸勒向癌细胞焚光探针的制备及其性能研究ｒｅｒｔｏｎｒｏｅｒｅｓａｅ－ｔａｒｅｔｅｄａｎｃｅｒＰｐａａｉａｎｄＰｐｔｉｏｆＦｏｌｔｇＣＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅＰｒｏｂｅＡｂｓｔｒａｃｔ－Ｎａｎｏｐａｒ