叶酸-壳聚糖纳米载体的制备及其靶向作用研究

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1、万方数据学校代码：10225学号：B14060学位’论文叶酸一壳聚糖纳米载体的制备及其靶向作用研究指导教师姓名：申请学位级别：论文提交日期：授予学位单位：邢志华方桂珍博士学科专业：林产化学加工工程2014—03-20论文答辩日期：2014-06—10东北林业大学授予学位日期：2014—06答辩委员会主席：论文评阅人：聋多厶符素大学万方数据UniversityCode：10225Re西sterCode：B14060DissertationfortheDegreeofDoctorPreparationofFolate--

2、chitosanNanoparticlesandItsTargetingCharacterizationAsDrugCarriersCandidate：Supervisor：ZhihuaXingGuizhenFangAcademicDegreeAppliedfor：DoctorSpeciality：DateofOralExamination：University：ChemicalProcessingEngineeringofForestProducts2014．06．10NortheastForestry万方数据摘要

3、壳聚糖(CTS)是一类重要的尚未高效利用的天然高分子。本文依据静电相互作用的原理，以壳聚糖和叶酸为原料，采用离子交联法制备了叶酸．壳聚糖纳米粒及载药纳米粒。利用红外光谱(IR)、激光粒度分析仪、透射电子显微镜(TEM)和zeta电势表征了纳米粒的化学结构、平均粒径、分散指数和外貌形态特征。测定了药物的包封率、载药率、体外释放速率、稳定性、体内外抑瘤活性、器官靶向性、平均滞留时间。本研究不仅改善了叶酸．壳聚糖纳米粒的制备方法，而且使其载药范围扩大，所得载药纳米粒既具备载药率高、包封率高、稳定性好的特点，又具有靶向缓释的

4、显著特性，为壳聚糖资源的合理利用提供基础数据和技术支持。具体研究内容及结果如下：以壳聚糖为载体、叶酸(FA)为靶向配体、三聚磷酸钠(TPP)为聚阴离子，在水相中，利用阴阳离子间的静电相互作用，采用离子交联法一步合成了空白(不载药)叶酸．壳聚糖纳米粒(CTS．TPP．FA)。红外光谱(IR)证实叶酸与壳聚糖是以离子键结合的。以纳米粒粒径(小于200nm)为指标，考察了对纳米粒粒径的影响因素，得到最佳制备工艺为：在水浴55℃、滴加速度ld／s、搅拌速度900～1000r／min条件下，以VmL浓度为2．0mg／mL的壳聚

5、糖醋酸溶液(醋酸浓度为1％，此时pH值为3．95)为底液，先向其滴加V／4mL浓度为1．0mg／mL的叶酸氨水溶液，然后向其滴加V／10mL浓度为2．0mg／mL的三聚磷酸钠溶液，滴加完毕，继续搅拌10分钟，得空白叶酸．壳聚糖纳米粒水分散体系，离心，冻干，得空白叶酸．壳聚糖纳米粒。在最佳制备工艺条件下，所得纳米粒为球形，大小均匀，水合平均粒径为145nm，分散指数为1．019。在空白纳米粒制备基础上，以包封率为指标，综合考虑载药率及粒径大小，考察了药物的加入方式及加入量对包封率及载药率的影响，结果表明：对于羟基喜树碱

6、(HCPT)，先使HCPT与壳聚糖醋酸溶液以3：10(羟基喜树碱：壳聚糖，w／w)比例混合。对于阿霉素(DOX)，先使DOX与TPP生成聚电解质，然后按空白纳米粒的制备方法制得载药纳米粒(HCPT／CTS．TPP．FA和DOX／CTS．TPP．FA)。所得HCPT／CTS．TPP．FA纳米粒平均粒径为150nm，包封率、载药率分别为89．90％、19．80％，体外累积释药率24h可达87％，其释放规律符合Higuchi方程，纳米粒表面带正电荷，电位值为+50．1mV，粒度稳定性较好，放置数十天粒径几乎无变化。所得DO

7、X／CTS．TPP．FA纳米粒平均粒径为162nm，包封率、载药率分别为91．00％、21．50％，体外累积释药率5d可达28．25％，其释放规律符合Higuchi方程。纳米粒表面带正电荷，电位值为+52．1mV，粒度稳定性好，放置数十天粒径几乎无变化。从粒径大小及所连接叶酸的量推断，以上两种纳米粒子具有很好的肿瘤靶向性。体外细胞实验考察了载羟基喜树碱纳米粒对人肝癌细胞HepG．2、人肺癌细胞A549及人乳腺癌细胞MCF．7的生长抑制作用。经MTT法检测，结果表明：HCPT／CTS．TPP．万方数据摘要FA对肝癌、肺

8、癌、乳腺癌细胞的生长均具有明显的抑制作用，其抑制率随药物浓度、作用时间的增加而升高，具有时间和剂量依赖性。HCPT／CTS．TPP．FA的抗肿瘤作用优于HCPT／CTS．TPP，与对照组相比差异显著(P<0．01)，证实HCPT／CTS．TPP．FA具有良好的肿瘤靶向作用。体内动物实验考察了纳米粒对荷S180肉瘤小鼠的抑瘤率的影响，结果表明：含