陕西汉中古旱莲内生菌多样性的研究.pdf

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5、菌组成及多样性。近年来，免培养技术主要应用在内生细菌的多样性研究中，而在内生真菌的研究方面报道很少。本文旨在比较全面的探究勉县武侯祠古旱莲内生菌组成及多样性，为古旱莲内生菌生物活性物质筛选等工作做准备，对进一步研究古旱莲内生菌代谢产物活性及古旱莲的保护等方面具理论意义。⑴纯培养分离古旱莲内生真菌，提取真菌基因组DNA，选用ITS1/ITS4扩增后进行分子鉴定。共分离内生真菌122株，67个形态类群，形态和分子鉴定结果表明内生真菌可分为5个门16个属，半知菌亚门(Deuteromycotina，65.7％)：链格孢属、茎点霉属、小穴壳菌属、盘二孢属、座壳孢属；子囊菌亚门(

6、Ascomycota，22.4％)：子囊菌属、小光壳属、曲霉属、座囊菌属、核盘属；担子菌亚门(Basidiomycota，5.9％)：裂褶菌属、担子菌属；接合菌亚门(Zygomycota，2.9％)：根霉属、毛霉属；球囊菌门(Glomeromycota，2.9％)：丛枝菌根真菌。⑵纯培养分离古旱莲内生细菌，选用27F/1492R扩增后进行分子鉴定，共分离内生细菌52株，结果表明内生细菌可分为4个门18个属，拟杆菌门(Bacteroidetes，7.7％)：鞘胺醇杆菌属；厚壁菌门(Firmicutes，15.4％)：游动球菌属、葡萄球菌属、芽孢杆菌属、类芽孢杆菌属、德库菌

7、属；变形菌门(Proteobacteria，11.5％)：不动杆菌属、假单胞菌属、埃希氏菌属、克雷伯氏菌属、克罗诺斯菌属；放线菌门(Actinobacteria，40.4％)：库克菌属、微球菌属、微杆菌属、短杆菌属、海迪茨氏菌属、放线菌属、微球菌属。⑶免培养研究古旱莲内生真菌多样性，提取古旱莲总基因组DNA，选用ITS1/ITS4对总DNA进行扩增，构建28SrRNA克隆文库，挑取阳性克隆子用pMD-19Tvector通用引物M13-47/M13-48对插入片段进行菌落PCR扩增，测序分析克隆菌液。结果表明107个阳性克隆可归为3类17个