川芎内生放线菌的多样性及其生物活性研究

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1、成都中医药大学（药学院）二0一七届硕士研究生学位论文川芎内生放线菌的多样性及其生物活性研究DiversityandbioactivityofEndophyticActinomycetesfromLigusticumchuanxiongHort.研究生姓名：林婵春指导教师：严铸云教授学科专业：生药学二○一七年五月万方数据学位论文川芎内生放线菌的多样性及其生物活性研究DiversityandbioactivityofEndophyticActinomycetesfromLigusticumchuanxiongHort.林婵春指导教师姓名：严铸

2、云教授申请学位级别：硕士专业名称：生药学论文提交时间：2017.4论文答辩时间：2017.5二○一七年五月万方数据成都中医药大学2017届硕士学位论文川芎内生放线菌的多样性及其生物活性研究研究生:林婵春专业：生药学指导教师：严铸云摘要川芎为伞形科植物川芎LigusticumchuanxiongHort.的干燥根茎，具有活血行气、祛风止痛的功效。川芎是著名的川产道地药材，四川都江堰为其传统道地产区。本研究以苓种期健康川芎为材料，分离内生放线菌，筛选对川芎根腐病原菌及常见人体致病菌具有抑制活性的内生放线菌菌株，探究其抑菌活性物质。了解川芎可培

3、养内生放线菌的多样性及其生物活性，初步研究川芎内生放线菌中的抗病菌株和活性天然化合物，为川芎根腐病的生态防治提供基础数据。首先，采用匀浆法及组织贴片法分离川芎内生放线菌，采用划线法获得内生放线菌纯培养物，结合传统形态、生理生化和分子生物学的方法对川芎内生放线菌进行了分类鉴定。本研究共获得36株川芎内生放线菌，鉴定为4亚目、4科、4属，即链霉菌亚目（SuborderStreptomycineae）链霉菌科链霉菌属Streptomyces；丙酸杆菌亚目（SuborderPrropionibacterineae）类诺卡氏菌科类诺卡氏菌属Noca

4、rdioides；微球菌亚目（SuborderMicrococccineae）原小单孢菌科原小单孢菌属Promicromonospora；小单孢菌亚目（SuborderMicromonosporineae）小单孢菌科小单孢菌属Micromonospora。其中链霉菌为优势菌群，占总菌比列的86%，该属又主要分布于9个类群。其次，以川芎根腐病病原菌及常见人体致病菌为指示菌考查了川芎内生放线菌的生物活性。结果表明，近27.78%的内生放线菌对川芎根腐病病原菌有较明显的拮抗作用，尤以菌株FL4、FL6、FL9、F11、F14抑菌能力较强，可用于

5、4种根腐病病原菌的防治。川芎内生放线菌对金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、枯草杆菌(Bacillussubtilis)、大肠埃希菌(Escherichiacoli)、黑曲霉(Aspergillusniger)和白色念株菌(CanidiaAlbicans)等5种人类致病菌表现出了不同程度的抑制活性；其中F19、FL5、FL7对5种指示菌均有抑制作用，菌株F3可抑制4种指示菌。采用形态、生理生化和及细菌16SrDNA序列鉴定，菌株F3为链霉菌属Streptomycessp.金色类群，菌株F19为暗灰链霉菌I万方数据成

6、都中医药大学2017届硕士学位论文Streptomycescanus，菌株FL5为肿痂链霉菌Streptomycesturgidiscabies，菌株FL7为暗色产色链霉菌Streptomycesphaeochromogenes。在GenBank数据库中登录号分别为KU975442、KU95442、KU975443和KU975444。最后，对根腐病拮抗菌株（FL9）的生物活性次生代谢产物进行了研究。采用纸片法对FL9摇瓶发酵产物生物活性及提取分离条件进行考查；再通过扩大培养制备大量发酵液，结合硅胶柱层析、HPLC等方法分离纯化代谢产物；最

7、后对产物进行活性检测及LC-MS检测分析。研究结果表明，FL9的次生代谢产物具有抗根腐病病原菌的活性；从FL9代谢产物中分离获得H5-1及H5-2两个成分，结合文献及LC-MS图谱分析，二者均为由羟基蒽环和糖基构成的糖苷类活性物质。上述研究表明：川芎内生放线菌多样性丰富，存在生物活性菌株，在川芎病害生态防治和活性天然化合物寻找等方面具有开发利用潜力。关键词：川芎；内生放线菌；分离鉴定；活性菌筛选；代谢产物II万方数据成都中医药大学2017届硕士学位论文DiversityandbioactivityofEndophyticActinomyc

8、etesfromLigusticumchuanxiongHort.Author:LINChan-chunSpecialty:PharmacognosyAdvisor:YANZhu-yunABS