内生放线菌和寄主植物的抑菌活性及其关系

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1、内生放线菌和寄主植物的抑菌活性及其关系作者：钟莉田新莉周敏王韬成秋香陈振华范云覃重军【摘要】从68种中草药植物中分离了560株内生放线菌菌株，其中84株(约占15%)对金葡菌有抑菌活性，36株(约6%)对白念珠菌有抑菌活性，提示中草药植物的内生放线菌可能是抗菌新药的一个来源。检测了9种中草药植物的水或乙醇抽提液对金葡菌的抑菌活性，发现内生放线菌菌株的抑菌活性与其寄主植物没有明显的对应关系。【关键词】中草药植物；内生放线菌；抑菌活性ABSTRACTThispaperreportsthattotal84or36outofthetested

2、560endophyticactinomycetesstrainsfrom68Chinesemedicinalherbs,shoycetes.KEYedicinalherbs;Endophyticactinomycetes;Inhibitionactivity目前发现的放线菌(主要来自土壤)产生的抗生素和生理活性物质超过10000种，占已发现微生物药物的约2/3［1］。近年来从独特生境中分离放线菌并寻找新的抗生素已逐渐受到重视，如从植物组织内部中分离其内生放线菌和寻找新抗生素［2］。我国拥有丰富的中草药植物资源，其中一些中草药长期被用

3、来清热解毒、化脓消肿，提示可能存在抗菌活性物质。本文报道从68种中草药植物中分离大量的内生放线菌，其中约15%菌株具有抗金葡菌的活性，约6%菌株对白念珠菌有抑菌活性。此外，初步探讨了内生放线菌与其寄主植物在抗菌活性方面可能的对应关系。1材料与方法1.1中草药植物和病原菌来源本试验所用大部分中草药植物采自上海植物园，丹参和灯盏花采自云南昆明(邱明华研究员提供)，青蒿采自四川酉阳(利民青蒿基地提供)，金葡菌由扬州大学微生物实验室金文杰老师提供。1.2培养基、试剂和抗生素试验中分离内生放线菌所用的为S培养基［2］、S培养基+重铬酸钾+萘啶酮

4、酸、S培养基+重铬酸钾+萘啶酮酸+链霉素、S培养基+重铬酸钾+萘啶酮酸+万古霉素等4种培养基(重铬酸钾的终浓度为85μmol/L，萘啶酮酸65μmol/L，链霉素2μg/ml，万古霉素4μg/ml)，纯化和进一步培养内生放线菌采用高氏一号培养基［3］。培养金葡菌用LB培养基。1.3植物内生放线菌的分离将采摘的新鲜植物用清水洗净，根、茎、叶各部分分开，于阴凉处风干。用70%的乙醇、0.87%的次氯酸钠和10%的碳酸氢钠分别处理5、20和10min以达到表面消毒，接着用无菌水洗涤三次，再用无菌滤纸吸干水分。将植物剪成约1cm的小段，置于上

5、述4种分离培养基表面，于30℃培养。样品表面消毒方法参照表1结果显示，来自22种中草药植物中的36株放线菌对于白念珠菌具有抑菌活性(约占测试菌株总数的6%)，其中来自贯众、磨芋、败酱和陆英等的内生放线菌菌株具有抑菌活性的比例较高，分别为21%、表143种中草药植物中对金葡菌和白念珠菌有抑菌活性的内生放线菌株数20%、17%和29%。2.2中草药植物的抽提液对金葡菌的抑菌活性为了进一步研究内生放线菌菌株与其寄主中草药植物在有或无抑菌活性方面是否有对应关系，我们测定了一些植物提取液的抑菌活性。选取内生放线菌菌株具有较高抑菌比例的紫金牛、野

6、荞麦、毛茛、紫菀和贯众等5种植物，以及具有较低抑菌比例的陆英、打破碗花花、括楼和泽兰等4种植物，用水或70%乙醇抽提，检测对金葡菌的抑菌活性。表2结果表明，虽然紫金牛、毛茛、紫菀和贯众等4种植物的水或醇提取物具有抑菌活性，但野荞麦的水或醇提取液中没有检测到抑菌活性；另一方面，虽然括楼的提取液中没有抑菌活性，但是陆英、打破碗花花和泽兰的提取液中却具有抑菌活性。这些结果显示，内生放线菌菌株对金葡菌的抑菌活性与其寄主植物没有明显的对应关系。3讨论由于植物内生菌来自独特的生存环境而成为人们寻找微生物新药的一个重要药源。在植物内生放线菌产生抗生

7、素方面，有报道从杜鹃花［6］、蛇藤［7］和卫矛科植物［8］分离到的内生放线菌产生了新的抗细菌或真菌的化合物。国内