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1、第二十三卷第九期楚雄师范学院学报Vol123No192008年9月JOURNALOFCHUXIONGNORMALUNIVERSITYSep12008葱内生真菌抑菌活性初探312233李光富汪正威李雪玲(11楚雄医药高等专科学校,云南楚雄675005;21楚雄师范学院化学与生命科学系,云南楚雄675000)摘要:目的:从葱的根、茎、叶中分离内生真菌,并进行初步抗菌活性检测,得到具有高抗菌活性的菌株。方法:11用PDA培养基分离葱的内生真菌;21用查氏培养基进行发酵实验。31进行滤纸片抑菌实验。结果:从葱中分离出的17株内生真菌,均具有抗菌活性,其中,
2、抑菌圈直径大于110cm的高抗菌性菌株有11株,占总分离菌株数的64171%。结论:葱内生真菌具有类似宿主植物葱一样的广泛抗菌性(分离得到的17株内生真菌均具有抗菌性),但由于宿主植物本身所具有的强抗菌性,使分离得到的菌株种属多样性较少。关键词:葱;内生真菌;抑菌活性中图分类号:Q93文献标识码:A文章编号:1671-7406(2008)09-0075-06葱(Alliumfistulosum)是百合科Liliaceace蒜属植物,是中国的一种很普遍的调味品或蔬菜。具有解热、祛痰、促进消化吸收、防癌抗癌、抗菌和抗病毒等药理作用。19世纪巴斯德首先发
3、现蒜属植物的抗菌活性,我国学者从20世纪50年代开始研究证实,后来研究发现,蒜属植物中起杀菌、抑菌作用的主要是大蒜素和其他一些有挥发性硫醚化合物。而一直以来只有直接从大蒜或葱等含有大蒜素的植物中提取或采用合成法等传统方法来获取大蒜素,耗材大,收效低。内生真菌(endophyticfungi)是指那些在其生活史中的某段时期或全部阶段生活在植物[1]组织内,对植物组织没有明显引起病害症状的一类真菌。近年来,国内外从多种植物内[2—3]生真菌中筛选出各种生理活性物质陆续见有关报道,内生真菌产生的生物活性物质存在极大的多样性(如:抗肿瘤、抗病毒、抗细菌、抗
4、真菌、抗虫等物质),表明植物内生真菌能够产生结构新、功能特殊的次生代谢产物,是新化合物、新药物的潜在资源,它们在[4]医药、工业、农业等领域具有重要的应用前景。由此可见,植物内生真菌是一类潜在的产生生物活性物质的巨大资源。尤其是某些内生真菌还可以产生和宿主植物相同或相似的[5]生理活性成分。本实验的目的是通过分析葱的内生真菌是否具有与其宿主(葱)相同或相似生理活性成分。为内生真菌抗菌活性开发应用做铺垫研究。3收稿日期:2008-06-10作者简介:李光富(1967—),男,楚雄医药高等专科学校副教授,主要从事生理学的教学与研究。33通讯作者:李雪玲
5、(1966—),女,副教授,E-mail:lxlyaoan@cxtc1edu1cn。·75·楚雄师范学院学报2008年第9期楚雄师范学院学报2008年第9期1材料111植物来源:采自楚雄陈家槽子村菜地,每次现做现采。112指示菌来源11211革兰氏阴性菌:大肠杆菌Escherichiacoli。11212革兰氏阳性菌:金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus、枯草芽孢杆菌Bacillus[7]subtilis、苏云金芽孢杆菌Bacillusthuringiensis以上指示菌取自楚雄师范学院化学与生命科学系微生物实验室。2实验方法21
6、1分离葱中的内生真菌21111PDA培养基的配制:马铃薯(去皮)200g,蔗糖20g,琼脂20g,水1000ml。3配制方法如下:将马铃薯洗净去皮,切成约2—3cm的小块,放入2000ml的烧杯中煮沸30min,注意用玻棒搅拌以防糊底,然后用双层纱布过滤,取其滤液加糖,再补足水至[8]1000ml,自然pH值。21112内生真菌的分离纯化及保藏:取新鲜健康的小葱,用自来水洗净,稍微沥干水分后,将小葱切成6—7cm长的小段,再用以下方法进行表面消毒:75%酒精漂洗3min→无菌水冲洗4—5次→011%升汞漂洗30s→无菌水冲洗6—7次。经上述处理后的
7、样品,在无菌状态下切成012—013cm×012—013cm的小片,放入灭过菌的带有干滤纸片的培养基中,去除多余水分后,再植于培养基中,用保鲜膜包好,于28℃条件下倒置培养;同时,将刚表面消毒的小葱片段,不经剪切直接在培养基上表面轻抹,做为对照。培养2天后,对照培养基中无真菌长出,其它培养基中开始有菌落形成,挑取从植物组织处长出的菌落,转接入PDA培养基中,经过两次转接,视纯化程度,再将其转接入PDA斜面试管中保藏。经纯化后的菌株即为葱的内生真菌。212内生真菌发酵培养21211查氏培养基的配制:也称为蔗糖硝酸钠培养基。配方如下:蔗糖30g,NaN
8、O32g,K2HPO41g,MgSO4·7H2O015g,KCl015g,FeSO4·7H2O0101g,水1000ml,
