细胞生物学实验.ppt

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1、细胞生物学实验CompanyLogo实验六细胞骨架和成熟组织观察细胞生物学实验CompanyLogo实验六细胞骨架和成熟组织观察一、实验目的：1.掌握用光学显微镜观察植物细胞骨架的原理及方法，观察光学显微镜下细胞骨架的网状结构。2.掌握植物成熟组织的观察方法和辨别。CompanyLogo细胞骨架（cytoskeleton）是指真核细胞中的蛋白纤维网架体系。广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外基质。狭义的细胞骨架是指细胞质骨架，包括微丝（microfilament，MF）、微管（microtubule，MT）、中间纤维（in

2、termediatedfilament，IF）。细胞（特别是真核细胞）中的骨架系统，不仅仅是活细胞的支撑结构，决定细胞的形状，而且与细胞运动、物质运输、能量转换、信息传递、细胞分裂、基因表达、细胞分化、极性生长等生命活动密切相关。二、实验原理CompanyLogo植物细胞用适当浓度的TritonX-100处理后，可破坏细胞内蛋白质，但细胞骨架系统的蛋白质却保护完好。考马斯亮蓝R250(CoomassiebrilliantblueR250,考马斯亮蓝R250)是一种蛋白质染料，处理后的材料用考马斯亮蓝R250染色后，用光学显微镜观察，可以见到一种网

3、状结构，即是细胞骨架结构。CompanyLogo三、实验器材及试剂1．器材：显微镜，烧杯，玻璃滴管，载玻片，盖玻片，镊子。2．试剂：(1)2％考马斯亮蓝R250染色液：称考马斯亮蓝R250lg，溶于250mL无水乙醇中，加冰醋酸35mL，再加蒸馏水至500mL。CompanyLogo(2)磷酸缓冲液(pH6.8)：6.8mmol／L磷酸缓冲液，调至pH6.8。(3)M缓冲液(pH7.2)：50mmol／L咪唑、50mmol／L氯化钾、0.5mmol／L氯化镁、lmmol／L乙二醇双乙胺醚、0.1mmol／L乙二胺四乙酸、1mmol／L巯基乙醇，调

4、至pH7.2。(4)1％TritanX-100：用M缓冲液配制。(5)3％戊二醛：用M缓冲液配制。(6)中性树胶。CompanyLogo四、实验材料材料：洋葱鳞叶、双子叶植物叶、马铃薯块茎、芹菜、梨果、南瓜茎、柑橘果皮、松针叶CompanyLogo五、实验步骤（细胞骨架观察）1．用镊子撕取洋葱鳞叶内侧的表皮若干片(约lcm2大小若干片)，置于50mL烧杯中，加入pH6.8磷酸缓冲液，使其下沉。2．吸去磷酸缓冲液，用1％TritonX-100处理20min。3．吸去TritonX-100，用M缓冲液洗3次，每次5min。4．用3％戊二醛固定30mi

5、n。5．磷酸缓冲液(pH6.8)洗3次，每次5min。CompanyLogo6．0.2％考马斯亮蓝R250染色10min。7．蒸馏水洗2次，然后将样品置于载玻片上，加盖玻片，于普通光学显微镜下观察。8．如果染色效果好，则可依次用50％乙醇、70％乙醇、95％乙醇、正丁醇、二甲苯处理样品，各5min。然后将样品平展于载玻片上，加1滴中生树胶，盖上盖玻片封片，制成永久切片。CompanyLogo（一）保护组织1、表皮：（1）撕取蚕豆叶、茄或其他双子叶植物叶下表皮一小块，制成临时装片，置显微镜下观察。可见表皮细胞呈不规则形状、排列紧密、细胞内不含叶绿体

6、，具有1个细胞核和一层紧贴细胞壁的细胞质，中央为1个大液泡。在表皮细胞之间有许多气孔器，它由一对肾形的保卫细胞及其之间的气孔组成。保卫细胞中含有叶绿体，靠气孔处的细胞壁较厚。在茄叶上还可观察到表皮毛。（2）撕取小麦或玉米叶的表皮一小块 （或用刀片把一层表皮和叶肉刮去），制成临时装片，置显微镜下观察。可见表皮细胞为长形，称为长细胞；在长形细胞之间有一些较小的短细胞。表皮细胞的侧壁 波形，互相紧密嵌合。还可观察到由一对哑铃形的保卫细胞的一对棱形的副卫细胞的中央的气孔构成的气孔器。五、实验步骤（成熟组织观察）CompanyLogo2、周皮：取椴木茎或茶

7、、桑、梨茎横切制片或马铃薯块茎制片，从低倍到高倍进行观察。可见茎的外方有几层扁平砖形，排列整齐而紧密的细胞，被染成红褐色，这是木栓层。其内侧有一层细胞，着色较浅，细胞核明显可见，这是木栓形成层。木栓形成层内侧有1至几层稍大，排列疏松的同形细胞，是为栓内层。三者合称为周皮。木栓层、木栓形成层和栓内层细胞的径向壁常在同一直线上，据皮可与皮层细胞相区别。在周皮上还可观察到向外突起的皮孔，有排列疏松的补充细胞存在。CompanyLogo（二）机械组织：1、厚角组织：取芹菜叶柄或南瓜茎、甘薯茎，用刀片横切成薄片，置于载玻片上，加一滴氯化锌-碘液，盖上盖玻片

8、，于显微镜下观察。可见在表皮内方有几层细胞呈多边形，其细胞壁常在邻接的角隅处增厚，呈淡紫色，这纤维素壁。由于胞间隙小，故增厚了的角隅，几