常见血红蛋白电泳图谱和临床应用.ppt

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1、血红蛋白电泳操作及常见血红蛋白电泳图谱血红蛋白的结构血红蛋白是由4条多肽链（2对）和4个可以结合铁和氧气的血红素组成血红素：铁原子与原卟啉Ⅸ复合物。珠蛋白：包括、β、γ、δ、ε和ζ珠蛋白6种。在人体的不同发育时期，其主要的血红蛋白（Hb）组成不同。常见的有：HbA(2β2),HbA2(2δ2),HbF(2γ2),HbH(β4),HbBart’s(γ4),血红蛋白电泳的检测一、原理：Hb中的珠蛋白和其他蛋白质一样为两性电解质，在不同的缓冲液中可带正或负电荷，在电场中向阴极或阳极移动，由于不同的蛋白质之间其等电点、分子大小、形态及所带电荷不同，其移动速率不同

2、（电泳迁移率不同），在一定的支持介质中可借以分离。二、仪器：HelenaBioSciencesSAS-3样本分析系统(英国海伦娜生物科学)三、操作：（一）血红蛋白液的制取1、取一份红细胞（或全血）加十份生理盐水洗涤，3000转/分钟离心5分钟，弃盐水2、洗涤三次后，弃盐水3、按压积红细胞体积加等体积蒸馏水，摇匀，再加1/2体积的四氯化碳震荡1-3分钟，3000转/分钟离心5分钟，吸取上层血红蛋白溶液（此浓度约为10%）待用（二）仪器操作1、开机2、吸取30ul血红蛋白溶液加入样本盘3、取两片点样刀锋放在自动加样器2，14号位，点样的时候把梳子从14号的位

3、置跳至12号位置4、电泳槽内加界面液（3100）5、揭掉电泳片表面的保护膜，放入电泳片，避免气泡，擦掉四周多余液6、用BLOTC吸去电泳片上多作的缓冲液7、放好碳棒，盖好盖子，按下箭头选择“”为测试项目再按“START”进入程序再按“Enter”开始电泳，约18分钟，仪器示警，按“STOP”结束操作，打开盖子，铲掉盐桥8、将电泳片放在染色架上，放入染色槽中，按下箭头选择“START”为测试项目约15分钟，仪器示警，表示已完成操作，按下“STOP”结束操作9、拿出电泳片即可扫描正常的血红蛋白电泳带正常成人：HbA(α2β2):94.5%-98.5%HbF(

4、α2γ2):<1%HbA2(α2δ2):2.5%-3.5%HbA:a2b2HbF:a2g2HbA2:a2d2正常新生儿：HbA(α2β2):12%-40%HbF(α2γ2):6%-93%HbA2(α2δ2):0.1%-1.0%HbA:a2b2HbF:a2g2HbA2:a2d2-地中海贫血-地中海贫血是由于珠蛋白基因缺失或功能缺陷导致珠蛋白链合成受到部分或完全抑制的遗传性溶血性贫血。-珠蛋白基因定位于16号染色体短臂最末端，如果缺失两个连锁的基因（--/）称为-地贫1，如果缺失一个（-/）称为地贫2，基因突变导致珠蛋白合成减少统称为非缺失型地贫，一般临床常

5、见的地中海贫血分为以下四种一、静止型-地中海贫血二、轻型-地中海贫血三、HbH病四、HbBart’s胎儿水肿综合征一、静止型-地中海贫血静止型-地中海贫血为-地贫2杂合子（-/）HbA2和HbF正常,红细胞形态正常，新生儿期可出现1%-3%HbBart’s,出生后3个月消失。二、轻型-地中海贫血轻型-地中海贫血为-地贫1杂合子（/--）或者-地贫2杂合子（-/-），HbA2含量为正常的低限（1.5%-2.5%），HbF正常，红细胞形态出现轻度异常（如大小不等，中央淡染区扩大，异形等），新生儿期HbBart’s可达5%-8%，6个月完全消失三、HbH病Hb

6、H病为地贫1与地贫2双重杂合子（-/--），或为地贫1与非缺型地贫双重杂合子（T/--）仅可合成少量的肽链，β肽链太多，形成四聚体β4，β4四聚体极不稳定，容易解聚成单体，氧化变性形成H包涵体，附着在红细胞膜上，使红细胞变形性降低，容易遭到破坏产生溶血。HbH明显增高（2.5%-40%），HbA2及HbF含量正常。四、HbBart’s胎儿水肿综合征HbBart’s胎儿水肿综合征为-地贫1纯合子，由于4个珠蛋白基因完全缺失，完全不能合成珠蛋白肽链，不能形成胎儿血红蛋白HbF（α2γ2），相对多的γ肽链形成四聚体γ4，称为HbBart’s，基因型为（--/-

7、-）HbBart’s>80%，无HbA，HbA2和HbF-地中海贫血是由于球蛋白链合成减少或完全不能合成所致。完全不能合成珠蛋白链的基因称为0，合成减少的称为+.临床上通常将地中海贫血分为以下四种类型：一、重型二、轻型三、中间型四、-地中海贫血合并异常HbE一、重型-地中海贫血重型-地中海贫血基因型（0/0或+/+或0/+），肽链几乎不能合成或者合成很少以致无HbA或量很低，HbF比率升高。由于肽链合成受抑制，体的肽链相对过多，结果游离的肽链在红细胞膜上沉淀，改变细胞膜的通透性，引起溶血反应。二、轻型-地中海贫血轻型-地中海贫血的基因型为:0/或+/,这

8、类患者还可以合成相当量的肽链，HbA2增高和/或HbF增高三、中间型-地中海贫血