几种异尖科线虫线粒体基因组序列测定及系统发育研究.pdf

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1、学校代码：10564学号：2013202820分类号：S855.9密级：硕士学位论文几种异尖科线虫线粒体基因组序列测定及系统发育研究刘珊珊指导教师：翁亚彪副教授学院名称：兽医学院专业名称：预防兽医学答辩委员会主席：李国清教授中国·广州2016年6月华南农业大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名：日期：学位论

2、文提交同意书本学位论文符合国家和华南农业大学关于研究生学位论文的相关规定，达到学位授予要求，同意提交。导师签名：日期：学科带头人签名：日期：摘要异尖线虫主要寄生于海鱼、海洋哺乳动物、海鸟和人类，呈世界性分布。人体异尖线虫病主要是食入含有某些异尖科线虫活的三期幼虫的海鱼所引起的一种食源性疾病，可引起人的急腹症和过敏性症状。目前，已报道可引起人体异尖线虫病的虫种主要有4个属：即异尖线虫属（Anisakis）、对盲囊线虫属（Contracaecum）、伪地新线虫属（Pseudoterranova）和宫脂线虫属（Hysterothylacium）。对异尖线虫进行准确的鉴定和分类

3、是诊断、防治和控制异尖线虫病的前提和基础。由于形态学（易受环境影响）和少量基因片段序列（缺乏有效的遗传信息位点）在分类上的局限性，异尖科线虫分类和其高级阶元的系统发育仍颇具争议。线粒体基因组序列是研究寄生虫分子分类、群体遗传、系统进化的一种很好的分子标记，然而关于异尖科这一重要类群线粒体基因组的研究较少，目前仅4种异尖科线虫线粒体基因组被解码。本研究的第一部分是对伪地新线虫复合种（Pseudoterranovadecipienscomplex）线粒体全基因组进行长PCR扩增，测序得到6种伪地新线虫线粒体全基因组,分别为P.azarasi13,954bp；P.bulbos

4、a13,957bp；P.cattani13,950bp；P.decipienss.l13,965bp；P.decipienss.s13,962bp；P.krabbei13,948bp（GenBank注册号为NC_027163，KU558720，KU558721，KU558722，KU558723和KU558724），均含有36个基因，其中12个蛋白编码基因，22个tRNA基因以及2个rRNA基因，且与其它线虫一样缺乏atp8基因，所有基因均为单向转录。6个伪地新线虫线粒体基因组的序列差异在3.8～9.4%之间，12个蛋白质编码基因的核苷酸和氨基酸序列的差异性分别在3.8

5、～25.8%和1.7～9.1%之间。在12个编码蛋白质的基因中，多以ATT、ATA和TTG作为蛋白质翻译的起始密码子，以TAA和TAG作为终止密码子，而cox1，cox2，cox3，nad5和nad4L基因在蛋白质翻译终止时使用了不完整密码子T和TA。基于线粒体全基因组蛋白编码基因的氨基酸串联序列，利用Bayes、MP和ML法对伪地新线虫及其它24种蛔虫进行了系统发育关系重建，结果显示：三种方法所绘制的进化树拓扑结构一致，证实了伪地新线虫复合种包含了6个种，且伪地新属与异尖属的亲缘关系较近而与对盲囊属的亲缘关系较远。本研究的第二部分对欧氏对盲囊线虫复合种（Contrac

6、aecumogmorhini）线粒体全基因组进行长PCR扩增，测序得到3个欧氏对盲囊线虫线粒体全基因组,分别为来自南半球南非的Arctocephaluspusilluspusillus（样本代码CoAPP），澳大利亚的IArctocephaluspusillusdoriferus（样本代码CoAPD）和来自北半球加拿大的海狮Zalophuscalifornianus（样本代码CoZC），线粒体基因组全长分别为为14,012bp，14,019bp和14,010bp（GenBank注册号KU558725，KU558726和KU558727），共包含36个基因，其中12个蛋白

7、编码基因，22个tRNA基因以及2个rRNA基因。序列分析表明CoAPD和CoAPP线粒体基因组差异性为0.6％（93个核苷酸替换），CoAPP和CoZC线粒体基因组差异性为1.7％（244个核苷酸替换），CoAPD和CoZC线粒体基因组差异性为1.7％（243个核苷酸替换）；对蛋白质编码基因的核苷酸和氨基酸序列进行分析，CoAPD和CoAPP的差异为0.6%和0.9%，CoAPP和CoZC的差异为1.8%和1.1%，CoAPD和CoZC的差异为1.8%和1.0%。且对于欧氏对盲囊线虫系统发育关系的研究结果显示南北半球欧氏对盲囊线虫的亲缘