牛多杀性巴氏杆菌菌影疫苗的制备及其免疫效力分析.pdf

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3、声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加标注和致谢的地方外，论文中不包一含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得黑龙江八农畳大一学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：ｆ曰期：扣／年＾月／Ｉ曰＾关于论文使用授权的说明一本人完全了解黑龙江八农畳大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和

4、借阅，可采用一影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意黑龙江八农畳大学可［＾用不同方式在不同刊物上发表，传播学位论文的全部或部分内容。研（保密的学位论文在解密后应递守此协议）究生签名：导师签名：ｌｉｆ曰期：言。么扫曰期；７＾／知《月／扛曰公年／月；Universitycode：10223Classifiedcode：S851.2Graduatenumber：XS133118Confidentialdegree：PublicHeilongjiangBayiAgriculturalUn

5、iversityMasterDissertationThePreparationandanalysisofImmuneEfficacyofbovinePasteurellamultocidaGhostsPostgraduate：ChangChun-longSupervisor：ProfessorNiHong-boPreventiveVeterinaryMajor：MedicineResearchdirection：ImmunemoleculesDegreecategory：MasterofAgronomyDaqingC

6、hinaJune,2016摘要牛巴氏杆菌病又称为牛出血性败血症，是由多杀性巴氏杆菌感染引起的一种急性传染病，急性型呈出血性败血症迅速死亡；慢性病例的病变多限于局部器官，通常表现为皮下结缔组织、关节、脏器的化脓性病灶。目前用于预防牛多杀性巴氏杆菌病的疫苗主要为强毒株的灭活菌苗，弱毒活菌疫苗和亚单位疫苗，由于传统的细菌全菌体灭活疫苗的免疫效果不理想，不能提供较强的保护力，弱毒活菌疫苗由于其本身存在活的多杀性巴氏杆菌，在宿主动物机体中存在毒力返强的风险。因此研制一种安全有效的疫苗对控制牛巴氏杆菌病具有重要意义。本试验以pHH

7、43质粒为模板，通过PCR扩增含噬菌体PhiX174的裂解基因E和CI857-PL-PR启动阻遏系统组成的温敏裂解盒CI857-PL-PR-E，再将裂解盒插入到pPBA1100载体中，构建裂解质粒pPBA1100-E。利用电转化的方法将其转入牛多杀性巴氏杆菌中，将含有裂解质粒的牛多杀性巴氏杆菌在37℃条件下培养至OD600nm值约为0.4时，将培养温度升至42℃进行诱导，制备牛多杀性巴氏杆菌菌影，分别计算诱导前细菌数和诱导后细菌数计算裂解效率，其裂解效率可达99.997%。经电镜观察发现裂解后的细菌保留了细菌的基本形态

8、结构，内容物几乎全部释放到菌体外，仅留下细菌空壳，在菌体中间可见明显的孔洞。应用制备的菌影疫苗对小鼠进行免疫接种，分析菌影疫苗对小鼠的免疫效力。将100只5周龄的雌性BALB/c小白鼠，随机分成4组：菌影组、菌影+佐剂组、灭活苗组和PBS对照组，每组25只，实验室适应1周后，间隔两周连续接种两次。在免疫前采血分离血清做阴性血清，在