董稚明食管鳞癌tgf受体基因启动子区甲基化状态研究.ppt

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1、食管癌我国是世界上食管癌发病率和死亡率最高的国家缺乏有效的早期诊断指标，就诊病人失去了最佳治疗时机95%以上食管癌为食管鳞状细胞癌（ESCC)冀医四院并非所有暴露个体均患病环境因素与遗传因素共同作用食管癌遗传因素和表观遗传因素亚硝胺类化合物吸烟、饮酒营养缺乏霉菌感染冀医四院传统的多途径多步骤的基因突变引起肿瘤的观点日益受到挑战，目前众多的研究者认为，肿瘤最早的发生可能源于干细胞阶段的表观遗传学改变，表观遗传学的改变可能发生的更早些。RNA干扰表观遗传学DNA甲基化组蛋白修饰染色体重塑冀医四院DNA甲基化是在DNA甲基转移酶的作用下,以S-腺苷

2、甲硫氨酸为甲基供体,将甲基基团转移到胞嘧啶第5位碳原子上,从而转变成5-甲基胞嘧啶（5-mC）。基因启动子区域的CpG岛正常状态下不发生甲基化，一旦由于某种原因而发生甲基化就会导致基因转录沉寂，使重要基因如抑癌基因、修复基因等丧失功能，有可能导致肿瘤发生。冀医四院冀医四院头颈部鳞癌、胃癌及胰腺癌细胞株中TβRⅠ基因甲基化与其表达降低有关。对非小细胞肺癌、前列腺癌的研究显示，TβRⅡ基因的表达缺失与其甲基化之间存在高度相关性。小细胞肺癌中TβRⅠ和Ⅱ表达缺失与基因甲基化无关。冀医四院研究目的本研究应用甲基化特异性PCR反应(MSP)和RT-PC

3、R技术检测食管鳞状细胞癌组织中TGF-β受体Ⅰ、Ⅱ基因(TβRⅠ、Ⅱ)启动子区甲基化状态和mRNA表达水平，并结合临床资料探讨其与临床病理资料的关系，为确定TβRⅠ、Ⅱ甲基化与ESCC发生发展之间的关系提供理论依据。冀医四院65例贲门癌组织、59例相应癌旁组织性别：男性51例，女性14例TNM分期：Ⅰ、Ⅱ期37例，Ⅲ、Ⅳ期28例病理分级：高、中分化组55例，低分化组10例年龄：范围在26-74岁，中位年龄57.4岁冀医四院基因CpG状态引物序列（5’—3’）退火温度(℃)产物大小(bp)TβRⅠUCAACCCTCCAAAACTAACAACTA

4、AACAA60147TGTTGGTTTTTGGTTATGTTTTATGTTTTTTMACCCTCCGAAACTAACGACTAAACGA52142CGGTTTTTGGTTACGTTTTACGTTTTTTβRⅡUTTGAAAGTTGGTTAAAGTTTTTGGA55123AAACAAAACCTCTCTCCACCCAMGAAAGTCGGTTAAAGTTTTCGGAACAAAACCTCTCTCCGCCCG53119冀医四院TβRⅠ和TβRⅡ基因MSP引物MethylationanalysisofTβRⅠandTβRⅡintumortissue(T)

5、andcorrespondingnormaltissues(N).u:indicatesthepresenceofunmethylatedgenes;m:indicatesthepresenceofmethylatedgenes.Cases1:tumor-specificmethylation;Case2:thetumorisfullymethylated,whereasthecorrespondingnormaltissuehasaveryfaintbanddemonstratingmethylation;Case3:bothoftumor

6、andcorrespondingnormaltissueunmethylated.case1case2case3冀医四院TβRⅠTβRⅡcase1case2case3UnmethylatedMethylated原始序列：GGGGAGCGTGGGGCGTGGCCAGAAACCGG非甲基化序列：AAAAAACATAAAACATAACCAAAAACCAA甲基化序列：AAAAAACGTAAAACGTAACCAAAAACCGA冀医四院UnmethylatedTβRⅠMethylatedTβRⅡ原始序列：TCGGGCGGAGAGAGGTCCTGC非甲基化

7、序列：TTGGGTGGAGAGAGGTTTTGT甲基化序列：TCGGGCGGAGAGAGGTTTTGTFrequencyofTβRⅠ,ⅡgenemethylationinESCCandadjacentnon-canceroustissuesGeneMethylationratioχ2Ptumortissueadjacentnon-canceroustissueTβRⅠ52.3%（34/65）40.7%(24/59)1.6800.195TβRⅡ70.8%(46/65)47.5%(28/59)6.9840.008冀医四院Therelationsh

8、ipbetweenTβRⅠ,ⅡgenemethylationandclinicaldatainESCCGroupTβRⅠTβRⅡNMUχ2PMUχ2PESCC653