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1、食管鳞癌中TGF论文马军，郭敏，李印，唐芙爱，虎建恩，段芳龄【关键词】食管肿瘤；癌,鳞状细胞；转化生长因子β;,,endoglin；新生血管化,病理性【Abstract】AIM:ToinvestigatetheexpressionsofTGFβandEndoglin/CD105inesophagealcarcinomafrompatientsinhighincidenceareainnorthChina.METHODS:TheexpressionsofTGFβandEndoglin/CD105mRNA
2、andproteinasamplesusingRNaseprotectionassayandimmunohistochemicalstaining.RESULTS:TGFβ1,TGFβ3andEndoglin/CD105mRNA,otherthanTGFβ2,athanthoseofadjacentnoncanceroustissue(P0.05).ThereRNAlevel.CONCLUSION:TheoverexpressionsofTGFβ1,TGFβ3andEndoglin/CD105mayb
3、einvolvedintheregulationofangiogenesisinesophagealcarcinoma.Endoglin/CD105isanimportantangiogenesismarkerasembraneinregulatingthebiologicalfunctionofTGFβ.Endoglin/CD105couldbeapotentialtargettoantiangiogenesistherapy.【Keys;carcinoma,squamouscell;transfo
4、rminggroRNA和蛋白表达水平进行检测.结果：食管癌组织中TGFβ1和TGFβ3mRNA较癌旁组织显著增高(P＜0.05)，TGFβ2无变化.食管癌组织中Endoglin/CD105mRNA较癌旁组织也显著升高(P＜0.05).TGFβ3mRNA与Endoglin/CD105mRNA的相关分析显示有相关关系.结论：TGFβ和Endoglin/CD105参与了食管鳞癌血管生成过程的调节，Endoglin/CD105不仅是细胞膜上TGFβ受体中调节TGFβ生物学功能的一个重要分子.freelRNA进
5、行检测并探讨其在血管生成中的作用.1对象和方法1.1对象30例食管癌标本来自食管癌高发区河南省林州市人民医院199903~05间手术患者.术中切除的食管癌标本迅速放入液氮中储存备用.其中男17例，女13例，年龄43~71（平均56±9）岁.病理学检查均为食管鳞状上皮细胞癌，其中高中分化20例，低分化10例.1.2方法1.2.1RNA提取和多探针RNA酶保护性分析根据以往描述的方法［6］，对食管癌标本进行多部位取材，在低温下研碎后采用Trireagent（美国MRC公司产品）提取总RNA，分光光度计（P
6、harmaciaBiotech）检测RNA浓度，以30μg分装备用.采用多探针RNA酶保护性分析试剂盒（美国Pharmingen产品），以hck3为多探针模板（包括TGFβ1,.freelager（美国HP公司产品）对mRNA表达进行定量分析.看家基因L32作为内参照以确定RNA的上样量，每例标本尽量重复多次，以减少误差，部分标本因为RNA量不足，只做1次，如图1中病例8的癌旁组织和病例9的癌组织.1.2.2肿瘤组织中血管的组织化学染色及定量分析食管癌CD105免疫组织化学染色及定量分析采用Fento
7、n等［7］的方法.①冰冻组织切片:新鲜标本用OCT包埋后,4~5μm连续切片,尽量避开出血坏死区.30例新鲜组织冰冻切片后,丙酮固定10min,空气中干燥10min后备用.②血管的组织化学染色(CD105)方法:PBS洗10min×1,5min×1;50mL/L正常血清封闭30min，PBS洗5min×3;30mL/L双氧水5min,PBS洗5min×3;CD105(1∶100)孵育过夜;PBS洗5min×3;HRP标记的羊抗兔抗体(1∶25)孵育1h,PBS洗5min×3;AEC显色40min，置于
8、PBS中.③肿瘤血管的定量分析:在显微镜下采用SONY自动数码成像系统(3CCD型)对每一例肿瘤组织随机选取起始点连续采集16个200×高倍视野形成一张完整肿瘤血管图片(总面积为1514mm2)用于定量分析.采用商用Imageproplus软件对血管进行定量分析,其原理为计算机随机选取多个点以测量随机点与血管的平均距离(以μm为单位),因此血管平均距离越小,血管密度越高.统计学处理：数据以x±s表示，使用SPSS10.0软件进行统计分析，食管癌组织及癌旁
