资源描述：
《紫杉醇改变fadd在食管鳞癌中的表达的论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、紫杉醇改变FADD在食管鳞癌中的表达的论文【摘要】目的人食管鳞癌细胞株eca109中fas相关死亡结构域蛋白(fasassociateddeathdomainprotein,fadd)表达与紫杉醇的关系影响分析,紫杉醇在食管鳞癌治疗中的作用机制探讨。方法流式细胞术检测不同浓度紫杉醇处理下，人食管癌细胞株eca109细胞凋亡率，同时采用rna表达呈现显著下降趋势。已有临床研究［5,6］表明紫杉醇联合顺铂、奈达铂、氟尿嘧啶等药物治疗食管癌,可以提高其总有效率,且毒副作用无明显增加，患者耐受性较好，表明
2、紫杉醇在食管癌治疗中具有很高的临床应用价值。同时紫杉醇对人食管癌细胞的生长有明显的抑制作用,使细胞分裂阻滞于g2-m期,并诱导肿瘤细胞凋亡［7］。但现有研究并没有对这一过程中食管癌细胞中fadd的表达变化情况作进一步研究。 作者通过检测不同浓度紫杉醇诱导人食管鳞癌细胞株ec-109细胞凋亡,并检测细胞表达fadd蛋白的变化情况，探讨紫杉醇抑制人食管癌细胞增殖、诱导细胞凋亡的分子机制,为临床应用提供实验依据。 1材料和方法 1．1试剂与药物泰素(紫杉醇的商品名,由百时美施贵宝公司惠供,6g/l
3、,分子质量8539u)，rpmi1640培养液、005%的胰蛋白酶及小牛血清为hyclone产品,annexinv（fitc）/pi凋亡检测试剂盒购于杭州隆基生物工程研究所,蛋白提取液购于pierce公司，兔抗人fadd单克隆抗体及鼠抗人β-actin单克隆抗体购于santacruz公司，考马斯亮蓝试剂盒购于南京建成生物科技有限公司。 1．2细胞与细胞培养人食管癌细胞株eca-109（atcc）由上海麦莎生物科技有限公司代购。细胞接种于含10%小牛血清的rpmi1640培养液培养,生长于37℃含
4、5%的co2孵箱中,待细胞生长至对数生长期开始实验。胰蛋白酶消化细胞后培养基重悬，调整细胞数为5×10.5/ml接种于6孔培养板进行培养，24h后更换新鲜培养液，同时实验组培养液中分别加入终浓度为5、10、20、50nmol/l泰素，对照组不加药物，每个浓度设3个复孔，培养24h后收集各组细胞。 1．3凋亡检测 收集每组细胞后pbs洗涤离心，细胞重悬于300μlbandingbuffer中，加入5μlannexinv-fitc混匀，室温避光孵育15min，再加入5μlpi，室温避光孵育5min
5、，上流式细胞仪检测细胞凋亡率，同时以不加annexinv-fitc及pi的一管作为对照。 14ol/l组与10nmol/l之间差异无统计学意义，药物浓度升高至20nmol/l和50nmol/l后细胞凋亡率显著升高，与5nmol/l组和10nmol/l之间差异有统计学意义，见图1。 22细胞表达fadd蛋白水平检测检测结果显示，所有实验组中eca-109细胞表达fadd蛋白水平较对照组均有升高，见图2，a。但仅紫杉醇药物浓度为20nmol/l组和50nmol/l组中细胞表达 fadd蛋白水平与
6、对照组差异有统计学意义，见图2,b。 3讨论 研究结果显示，紫杉醇能诱导人食管癌细胞株eca-109细胞凋亡，当紫杉醇浓度达到20nmol/l和50nmol/l时，细胞凋亡率显著升高。这一研究结果提示，只有紫杉醇达到一定血药浓度后，才会对食管癌细胞产生抗癌作用。低浓度紫杉醇作用可能只会抑制细胞增殖，并不一定能引起食管癌细胞的凋亡。fadd是fas受体和部分tnf死亡受体家族成员介导信号通路中的胞质死亡信号衔接蛋白，其羧基端的死亡结构域dd与fas分子胞浆段内的dd结合，当fas与fasl结合导
7、致fas胞内的死亡域形成三聚体而活化,并引起与之结合的fadd构象改变,使caspase-8前体集聚、断裂和激活,产生有活性的caspase-8,从而激发一系列下游的caspase-3等级联反应,诱发细胞凋亡［8］。检测结果显示，当紫杉醇诱导人食管癌细胞株eca-109细胞凋亡时，细胞表达fadd蛋白水平显著升高，而低浓度组之间差异无统计学意义。这表明紫杉醇可能通过fas/fasl途径在食管癌治疗中起作用，一定剂量的紫杉醇可以诱导食管癌细胞fadd表达水平的升高，促进癌细胞凋亡。这也提示在抗肿瘤治
8、疗过程中，紫杉醇的用量也是关键。 食管癌的治疗是一个综合治疗的过程，化疗只是所有治疗方法中的一种。紫杉醇虽然在食管癌临床治疗中已经显现出一定的价值，但仍无法彻底改变食管癌疾病的预后。作者也仅仅选用了食管癌中的鳞癌细胞株作研究，还不能代表食管癌所有病理类型，将进一步深入研究，以期能为食管癌的治疗提供更为有价值的理论基础。 参考文献 ［1］c,taylorhl,e,etal.am.chem.soc,1971,93:2325-2327. ［2］ferreiracg,tolisc,
