白桦BpCUC2基因的表达特性及遗传转化.pdf

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1、学校代码：１１）口５学号：Ｓ１６６８２学化冷文白轉够Ｃ［／Ｃ２基因的表泣特性及逸传转化＂，‘－＇‘’＇．．Ｖ－－Ｘ．－徐焕文Ｉｍ．．．ＰＶ巧＃教师巧名：刘桂丰教授东北林业大学申请学位级别：硕±学科专业：林木遗传育种ｐ论文提交日巧：２０１６年４月论文巧巧日巧：２０１６年６月巧予学位单位：东北林业大学巧予学位日巧，２０１６年６月答辩委巧会主巧：论文评奶人：ｉ如抑方乂争＇■．．、．，、Ｉ．＿一？一ｒ？．ｒ．．、？’－－－＇Ｖｒ二。节－，中．皆／’．１■

2、Ｉ．沪武听；；单、．，片护：／武游户巧ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＣｏｄｅ：１０２２５ＲｅｇｉｓｔｅｒＣｏｄｅ：Ｓ１６６８２ＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎｆｏｒｔｉｉｅＤｅｒｅｅｏｆＭａｓｔ；ｅｒｇＥｘｒｅｓｓｉｏｎＣｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄＧｅｎｅｔｉｃｐＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｉＢＣＵＣ２ｉｎＢｅｔｕｌａｌａｔｈｌｌａｐｐｙｐｙＣａｎｄｉｄａｔｅ：ＸｕＨｕａｎｗｅｎＳｕｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＬｉｕＧｕｉｆｅｎｐｇＡｓｓｏｃｉａ化Ｓｕｅｒｖｉｓｏｒ：ｐＡｃａｄ

3、ｅｍｉｃＤｅｒｅｅＡｌｉｅｄｆｏｒ：ＭａｓｔｅｒｇｐｐＳｐｅｃｉａｌｉｔｙ：ＦｏｒｅｓｔＧｅｎｅｔｉｃｓａｎｄＴｒｅｅＢｒｅｅｄｉｎｇＤａ化ｏｆＯｒａｌＥｘａｍｉｎａｔｉｏｎ：Ａｒｉｌ２０１６ｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ：ＮｏｒｔｈｅａｓｔＦｏｒｅｓｔｒＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｙｙ摘要摘要Ｃｔ／Ｃ２（ＣＷ－ｍ４／唯ＤＣＯＴＴＬＥＺＸＷ２）属于植物特有的ＮＡＣ家族ＮＡＭ超家族成员。该基因在植物顶端分生组织的形成、器官原基的形成及边界的建立、叶边缘形态建成、花的形态建成及生长发育等过程中发挥作用，并受的调

4、控。（＾往对该基因的研究主要集中在模式植物巧南芥、水稽中，在木本植物中的研巧鲜有报道。本研究Ｗ白禅（化化妳炒航ｔＳｕｋ．）为遗传转化受体，进行白枠卸Ｃｔ／Ｃ２基因的表达特性分析及一该基因的遗传转化研巧，为人们进步了解该基因的功能奠定基础。研巧结果如下；（１）ＣＣ／Ｃ２基因表达特性研充表明：ＣＣ／Ｃ２基因上游１４９７ｂ该序列邸克隆邸ｐ，分析的顺式作用元件－－，结果表明，该序列含有ＴＡＴＡｂｏｘ、ＣＡＡＴｂｏｘ、激素响应、环境胁迫响应和转录因子结合等不同元件。选取生长素响应元件ＣＡＴＡＴＧＧＭＳＡＵＲ的核也序列ＣＡＴＡＴＧ，构建报告

5、载体，利用酵母单杂交技术获得２０条与该元件互作的蛋白，这些蛋白均具有转录因子特性的蛋白质结构功能域。构建Ｐｒｏｍｃｕｃ２：：王ＵＣ载体，采用根癌农杆菌介导的合子胚法进行白枠的遗传转化，ＰＣＲ检测己成功获得３个转基因株系。对转基因株系的顶芽、叶、茎、根等姐织部位进行实时定量ＰＣ艮，结果表巧，Ｐｒｏｍｃｕｃ２具有启动ｉＣ／Ｃ表达的活巧和时空表达特异性，顶芽中的表达量高于其它组织部位，叶次之，在根中的表达量最低。对获得的转Ｐｒｏｍｃｕｃ：乂Ｃ／ＣｅＪＡ、ＡＢＡ、ＩＡＡ、ＧＡ激２株系分别进行Ｍ素的处理一，结果表明，不同组织部位对４种激素的应

6、答反应不致。（２）卸ＣＵＣ２基因的遗传转化研巧表明；从白枠中克隆得到卸Ｃｔ／Ｃ２基因，经过多序列比对分析确定该基因属于ＮＡＣ家族ＮＡＭ超家族成员，且与拟南芥处Ｃｔ／Ｃ２、葡萄阿（：＾／巧。等基因具有较高相似度，泣些基因均与顶端分生组织和叶片的发育相关根据－应用酶切技术调控卸ＣＣ／Ｃ２基因序列，Ｗ基因采用重叠延伸ＰＣＲ克隆卸ＣＣ／Ｃ２，－构建白枠邸Ｃ＾／Ｃ２基因的植物过表达＊（？过表、抑制表达载体和抗》？次八＾调控的卸乃／０２／达载体。采用根癌农杆菌介导的合子胚法进行白枠的遗传转化，通过ＰＣＲ、实时巧光定量ＰＣＲ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ

7、杂交对转基因植株进行鉴定，结果表明，邱０７Ｃ２己成功整合到植物基因组内并在１？１＾八水平有表达。通过对转３５８：：邸（：｛／〔２白樓株系进行表型观察，发现其￣苗高比对照植株的苗髙低３４．０３％、４７．巧％，节间距主要位于０１．２ｃｍ，而对照植株的节￣２０ｃｍ间距主要位于０．８．。关雪词白梓；卸ＣＣ；口；适传转化；表达特性－－１ＡｂｓｔｒａｃｔＡｂｓｔ巧ｃｔ－Ｃｆ／Ｃ２ＣＣ／户－Ｓ任ｃｏｍ说）饼Ｖａｍｅｍｂｅｒｏｆ化ｅｌａｎｔｓｅｃｉｆｉｃｆａｍｉ（。，ｐｐＮＡＣｌｙＮＡＭ＊ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｉｓ

8、ｒｅｕｉｒｅｄｆｏｒｔｈｅｓｈｏｏｔａｉｃａｌｍｅｒｉｓ