白桦抗虫基因遗传转化研究及转基因植株的抗虫性

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1、摘要应用农杆菌介导法向白桦(BetulaplatyphyllaSuk)基因组中导入抗虫基因(蜘蛛杀虫肽与Bt基因C肽序列连接在一起表达的一种融合蛋白基因)，并首次获得抗虫转基田植株。为白桦的遗传改良与高新技术育种开辟了一条新途径，也为其他林木树种的遗传改良提供了理论依据。利用双元载体的根癌农杆菌LBA4404菌株(Agrobacteriummmefaciens)，食质粒pYHY(目的基因及nptll、gus基困)，对白桦试管苗茎段，叶柄，叶片三种外植体进行侵染，结果表明：大叶片生氏势强，为转基因的最优外植体，转化率能够达到22％。转基因}郧霉素抗性植株

2、中，GUS表达阳性率为43％，随机抽样的方法进行杀虫肽和nptll基冈的PCR检测阳性率均为100％。f经过分子生物学检测表明，Southern斑点杂交765％植株表现阳性。转基因植目的基因(蜘蛛杀虫肽+Bt基因的C肽)的PCRSouthern杂交阳性率为87．5％。经过Southern印迹杂交47．2％的GUS阳性苗杂交呈阳性，说明外源基因已稳定整合到白桦基阕组中，多次继代后，仍很稳定。Northern斑点杂交表明，外源基因在转基因植株中正常表达／o转基因植株的杀虫实验结果表明，转基因植株的杀虫率能达到30％以上。舞毒蛾幼虫发育推迟，15犬时处理为4

3、龄，但对照仍为2龄，发育推迟了2个龄期；舞毒蛾生长受到抑制，对照的体重为处理的9．7倍与6．4倍，外源基因严重抑制幼虫的生长，说明外源基冈在转基因白桦中能够正常表达，转基因植株表现一定的抗虫性。关键词自桦遗传转化分子杂交抗虫性StudiesonInsectResistantGeneTransformationofBetulaPlatyphyllaandtheInsectResistanceofTransgenicPlantsAbstractThepaperfirstreportedthattransgenicplantsofBetullaPlatyph

4、yllawereobtainedbyAgrobacteriummediatedmethodinChina．ItreplenishedtheblanknessofBirchgenetictransformation，andprovidedanewpathforgeneticimprovementinthisspecies．ThematerialsasexplantintransformationcomefromBirchlear,stemsegmentandleafstalk,andtheSpidertoxingenewasusedasforeignge

5、neforthistransformationexperiment．ItshowedthatthebestexplantwasthebigIeaf,onwhichthetransformationfrequencywas22％．ByGUSdetection．therewere43percentoftheplantswithkanamycinresistance，and100percentofpositiveresult，byPCRamplification，wasgottenfromrandomsampling．Itindicatedthat76．5p

6、ercentofpositivefrequencyofalltheplantswasachievedbyusingSoutherndothybridization，87．5percentoftheplantswithGUSpositiveactivitywasgottenbyPCRsouthernblottingand42percentoftheplantswithGUSpositiveactivitywasgottenbysouthernblotting．Itmeansthatinsectresistantgenewastransferredandi

7、ntegratedintogenomeoftheplants．Bynortherndotblotting，italsoshowedthattheforeigngenecouldexpressinthetransgenicplants．TheinsectfeedingtestindicatedthatthedevelopmentofLymantriadisparwasclearlyputoff,inwhichtheinsectsfeededtransgenicplantsWere2ages，whentheinsectsasthecontrolwere4a

8、gesaftertreating15days．Besides，theinsectgrowthw