色谱柱清洗再生方法（超详细）.docx

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1、记得有次在在线课程的微信群讨论时，有同学问我关于液相色谱柱的再生问题。今天就来给大家讲讲如何进行色谱柱的再生。通常情况下，对于常用的反相色谱柱出现了严重的柱效降低需要考虑再生时，建议大家用以下流程来进行冲洗： ·  【冲洗流程】  ·•···········♦1♦···········20倍柱体积水：乙腈=95%：5%（用于移除系统中缓冲盐，可根据常用缓冲盐浓度调整比例）···········♦2♦···········20倍柱体积乙腈···········♦3♦···········5倍柱体积异丙醇···········♦4♦········

2、···20倍柱体积正己烷···········♦5♦···········20倍柱体积乙腈20倍柱体积水：乙腈=95%：5%（可与步骤1保持相同的比例）···········♦6♦···········用所需的流动相比例重新平衡色谱柱 关于色谱柱的再生，我相信大家能看到很多相关文章，建议大家可以根据实际需求来选择再生条件。老师今天要和大家讲的是关于上文给出的条件的柱体积的问题。·············································································♣实际上在色谱柱

3、冲洗时，很多实验室习惯用冲洗时间来评价是不是达到我们想要的效果。例如某位师傅告诉你把这个柱子冲半个小时就可以了。然而色谱柱的冲洗应该使用冲洗的溶剂体积来评价冲洗效果。例如这次提到的20倍柱体积的乙腈冲洗色谱柱是指什么呢？其实柱体积需要按照你使用的色谱柱的内径和柱长来计算。·  【公式如下】  ·•通过公式就很容易算出柱体积了，例如一根4.6mm内径，150mm柱长的色谱柱柱体积为：如果要用20倍柱体积的乙腈冲洗色谱柱就需要约34mL的乙腈，假设你的柱流量是1mL/min，那就要用乙腈冲洗34分钟。当柱流量是1.5mL/min时就需要用乙腈冲洗约

4、23分钟。不知道这样的解释大家能理解么？以后在色谱学堂微信群和大家讨论色谱柱冲洗时，记得不要只和我说你曾经冲洗色谱柱用多少时间，还要说流量哦！最后提醒大家，冲洗色谱柱时，色谱柱的尾端不要接检测器，接一个可以收纳废液的容器就行了。为了应对不同类型的分析项目，实验室里常常会配置三种柱子：一根弱极性柱，一根中等极性柱，和一根强极性柱。那么，所谓的强极性柱，该选哪一种呢？—END—