【实验】微生物的分离与纯化.ppt

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1、酿酒酵母是一种重要的工业微生物，也是葡萄酒品质的灵魂。自古以来，葡萄酒都是把成熟葡萄破碎，利用果皮表面的酵母菌进行自然发酵，这种方法既省事又有效。随着酿酒技术的进步，人们开始用纯净的酿酒酵母进行发酵，具有杂菌不易繁殖、发酵迅速彻底、酒精得率高、残糖低、酒容易澄清、酒质好等优点。怎样获得纯净的酿酒酵母呢？微生物的实验室培养——自酿葡萄酒中酵母菌的分离与纯化一、培养基概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。微生物需要的营养物质（2）还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。（1）一般都含有碳源、氮源、无机盐和水等营养物质；绝大多数

2、微生物并不能利用琼脂作碳源，琼脂一般只起到凝固的作用。按照培养基外观的物理状态分类固体培养基（1.5%～2%琼脂）菌落（一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体）液体培养基（不添加琼脂）微生物生长后培养基变浑浊半固体培养基（0.2%～0.5%琼脂）如果要获得大量的酵母菌菌体，应该用固体培养基还是液体培养基？把自酿葡萄酒接种到液体培养基中培养，获得的菌体只有酵母菌吗？怎样获得纯净的酵母菌培养物？分离纯化用固体培养基还是液体培养基？获得纯净培养物的关键是？二、无菌技术在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术。无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开。手上的微生物培养

3、皿灭菌培养基未灭菌无菌技术主要包括：对操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；对器皿、接种用具和培养基等进行灭菌；操作过程在酒精灯火焰附近进行；避免已灭菌的材料用具与周围物品接触。项目概念常用方法应用范围消毒使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法：在100℃煮沸5～6min一般物品巴氏消毒法：在70～75℃煮30min或在80℃煮15min一些不耐高温的液体，如牛奶化学药剂消毒法如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等紫外线消毒法：紫外灯照射30min接种室、操作台项目概念常用方法应用范围灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所

4、有的微生物(包括芽孢和孢子)灼烧灭菌：酒精灯火焰接种工具的灭菌和试管口的灭菌干热灭菌：在160～170℃下灭菌1～2h玻璃器皿、金属工具的灭菌高压蒸汽灭菌：在压力为100kPa，温度为121℃的条件下，灭菌15～30min培养基、无菌水及容器的灭菌制备培养基三、分离纯化酵母菌倒平板分离纯化酵母菌平板划线法稀释涂布平板法28℃恒温倒置培养观察结果，菌落鉴定计算溶化称量灭菌微生物的接种技术平板划线法为什么要进行稀释？稀释涂布平板法1.怎样确定菌落是否是酵母菌？2.怎样进行进一步的纯化？3.怎样进行大规模的培养？4.怎样进行菌种保藏？课题延伸——菌种保藏1.斜面低温保藏法：将菌

5、种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌充分生长后，棉塞部分用油纸包扎好，移至4℃的冰箱中保藏。缺点：保存时间不长，每3-6个月需要转移到新鲜的培养基。2.甘油管冷冻保藏法将菌液与灭菌后的甘油等体积混合后，-20℃冷冻保存。可保存2-4年。高压蒸汽灭菌：100kPa、121℃，维持15-30min。