【实验】微生物的分离与纯化.doc

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1、微生物的实验室培养——自酿葡萄酒中酵母菌的分离与纯化一、实验目的：掌握无菌技术的操作，尝试用平板划线法和稀释涂布平板法分离纯化酵母菌。二、实验步骤（1）制备培养基（马铃薯琼脂培养基）：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板（已完成）（2）分离纯化实验步骤操作流程流程叙述操作目的、作用接种方法一：点燃酒精灯↓1.灼烧接种环并冷却↓2.沾取菌液↓3.平板划线↓4.转动培养皿约70°角↓5.灼烧并冷却接种环↓6.平板划线↓7．倒置培养用火柴点燃酒精灯，保证实验操作在酒精灯火焰进行将接种环放在火焰上灼烧，直至烧红，让接种环自然冷却打开装有菌液的试管，塞子要拿

2、在手上，将试管口通过火焰灭菌，将冷却的接种环伸入菌液中，沾取菌液。将试管口通过火焰灭菌，用塞子塞住试管左手将皿盖打开一条缝隙；右手把沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划3到5条平行线（不要划破培养基），盖上培养皿盖逆时针旋转培养皿约70°角将接种环放在火焰上灼烧，直至烧红让接种环自然冷却从第一区域划线的末端开始往第二区域划线，重复以上操作，在三、四、五区域划线，注意不要将最后一区的划线与相连。（也可以用连续划“Z”字形线的方法倒置培养皿，放入培养箱中培养避免周围环境中微生物的污染清除；防止杀死菌种防止塞子被污染；清除的杂菌接种到培养基表面调整角

3、度，准备第二区域的划线在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面减少培养基内的水分蒸发，使培养基保持湿润；防止水珠回流打散菌落在右图所示的培养皿内用笔模拟接种环画出两种平板划线法的划线轨迹接种方法二：1.系列稀释操作准备六只试管↓分别加入4.5mL蒸馏水并灭菌，编号↓取mL菌液放入第1支试管并混匀↓从第1支试管取0.5ml菌液放入第2只试管并混匀↓重复步骤，直至最后一支试管2.涂布平板操作滴加100μL菌液到培养基表面↓引燃涂布器，待酒精燃尽后，冷却8～10s↓把培养皿打开一条缝↓在培养皿盖内侧进一步冷却涂布器

4、，均匀涂布菌液，转动培养皿，涂匀↓盖上皿盖,放置10min↓倒置培养皿，放入培养箱中培养清除涂布器上的杂菌使菌液均匀分布在培养基表面使液体被充分吸收结果观察观察划线平板和涂布平板上的菌落形态、颜色、大小，可挑取少量菌落制成临时装片，显微镜下观察。对菌落进行初步鉴定22三.巩固检测1．获得纯净培养物的关键是()A．在无菌环境中培养B．接种纯种细菌C．接种环灼烧灭菌D．防止外来杂菌的污染2．巴氏消毒法常用于酒、奶等食品的消毒，该消毒法就是加热到70～75℃、保持30min，或加热到80℃、保持15min，能杀死一般杂菌和病原菌。这与灭菌的要求相比

5、，巴氏消毒法(　　)A．不能杀灭芽孢和孢子B．只能杀灭芽孢等休眠状态的细菌C．能杀灭各种细菌，包括芽孢D．能杀灭各种真菌，包括孢子3．细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部分的微生物（）A．接种环、手、培养基B.高压锅、手、接种针C.培养基、手、接种环D.接种环、手、高压锅4.下列操作与消毒或灭菌无关的是（）A.接种前用酒精灯火焰灼烧接种环B.接种前用酒精擦试双手C.接种在酒精灯水焰旁完成D.培养基在冷却到50℃时倒平板5．制备固体培养基的步骤是()A．计算、称量、倒平板、溶化、灭菌B．计

6、算、称量、溶化、倒平板、灭菌C．计算、称量、溶化、灭菌、倒平板D．计算、称量、灭菌、溶化、倒平板6.平板冷却凝固后要将平板倒置，其意义是（）A.防止菌种死亡B．利于培养基的冷却C．利于大肠杆菌的接种D．防止皿盖上的冷却水倒流入培养基7．将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入恒温箱培养的目的是（）A．为了检测温度是否最适宜B．检查培养基是否灭菌彻底C．为了下次接种时再使用D．没必要放入未接种的培养基8.下列关于平板划线操作的叙述正确的是（）A．使用已灭菌的接种针、培养皿，在操作过程中不再灭菌B．打开含菌种的试管，需通过火焰灭菌，取出菌种后，

7、需马上塞上棉塞C．将培养皿盖全部打开后，用沾有菌液的接种环进行划线接种D.接种时，接种环在培养基上迅速划线后盖上皿盖9.在农业生产研究上，常需要进行微生物的培养和计数，下图是利用平板划线法进行微生物接种过程中的部分操作，有关叙述不正确的是（）A．每次划线前都需要灼烧接种环B．接种环冷却后从上一区划线的末端开始划线C．最后一区和第一区要保证不重叠D．只有在图中的5区域才可以得到所需菌落10.稀释涂布平板法是微生物培养中的一种常用的接种方法。下列相关叙述错误的是（）A．操作中需要将菌液进行一系列的梯度稀释B．需将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养

8、基表面C．不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个的菌落D．操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理11.下列关于平板划线法和稀释涂布平板法纯化大肠杆菌的叙述