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1、小华锯齿/KiT{Neocaridinadenliculatasinensis)卵黄iKH介成双源性分析cDNACloningandExpressiveCharacterizationofVitellogenininNeocaridinadenticutatasinensis摘要:卵黄蛋白原(Vitellogenin,Vg)是广泛地存在于卵生脊椎和无脊椎动物体内的雌性特异性蛋白,是卵黄蛋白(vitellin,Vn)的前体,本文通过同源克隆的方法从成熟中华锯齿米虾的卵巢中克隆到了一条长474bp的VgcDNA序列。并根据此序列设计了DNA探针,之后提取中华锯齿米虾卵巢的不同发育期,分别提取卵巢
2、和肝胰腺的总RNA,用RT-PCR方法进行半定量实验,探讨不同卵巢发育时期卵巢与肝胰腺在Vg表达中所发挥的作用，同时通过免疫组织化学方法，对中华锯齿来虾的Vn发生过程进行了观察。结果表明，卵巢与肝耽腺均为Vg合成部位,在卵巢发育前期与中期肝胰腺为主要合成部位.后期卵巢为主耍介成部位。卵巢中内源性卵黄物质发牛的主耍场所融卵母细胞质，而肝胰腺巫外源性卵黄物质来源的主耍场所。无组化免疫结果.Abstract:Vitellogenin(Vitellogenin,Vg)iswidelypresentinoviparousvertebratesandinvertebrates,it?sfemale-sp
3、ecificprotein,vitellit/s(viLel1in,Vn)precursors.asequenceof474bpoftheVgcDNAwasgotusingthismethodofhomologycIoningfromamature^eocaridinadenticulatasinensis.TheDNAprobeswasdesignedbasedonthissequence,thencollectedtheNeocaridinadenticulatesinensisovariesatdifferentdevelopmentalperiods,extractedthetota
4、lRNAfromovariesandhepatopancreas,usingRT-PCRtomanipulatesemi-quantitativeexperiments,toanalyzethefunctionoi*differentdevelopmentalstagesofovarianandIiverintheVgexpression,atthesametime,usingimmunohistochemicalmethods,observedtheproductionofVn.TheresultsshowedthatbothovariesandhepatopancreasareVgsyn
5、thesissite,hepatopancreasisthesitelorthemainsynthesisintheearlystageandmedium-termofovaries,ovarianisthesitelormainsynthesiswhileiLFsmature・Endogenousovarianyolksubstancesemergedl'romoocytecytoplasm,whilethehepatopancreasistheprincipalplaceofexogenousyolkmateria1.Non一immunestainingresults・前言中华锯齿米虾具
6、有广盐、广温性，繁殖力快,生命力强等特点.使其成为生态、生理和褂理等实验的良好材料。并且由于中华锯齿米虾产量大,有一定的经济价值。Vitellogenin这个名称最初由Pen"等人在1969年提出，指雌性昆虫血液淋巴蛋白，后来这•名称被广泛用于待指雌性动物血浆中的卵黄蛍白原•而卵黄蛋白原是卵黄蛋白的前体。虾类在未开口时期，英胚胎仔体发育、生长需耍的能虽和营养完全依赖卵如而卵黃的主要成分是Vn,因此Vn的数虽和质竄对于维持虾类早期的生命至关重要回。同时Vg还具有蛋白载体与受体的作用⑶。动物的Vg按来源不同可以分为内源性Vg和外源性也两种，前者由卵子木身通过卵内合成而产牛；眉者则由卵子外其他细胞
7、、组织或器官通过卵外介成以后再转入卵子内。木文使用同源克隆的方法克隆了中华锯齿米虫卜卵黄蛋白原cDNA部分片段，并根据得到的中华锯齿米虫卜也cDNA部分片段设it引物作为探针,利用PTPCR的方法对Vg的表达部位与各个时期的农达情况做了一个探讨，在制备抗体的慕础上利用免疫组织化学方法，对中华锯齿米虾的Vn发生过程进行了观察，木文旨在探明中华锯齿米虾Vn的发生规律,为研究其繁殖生物学,发育生物学提供基础,为其他
