人教版教学素材微生物的实验室培养 学案.doc

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1、课题1微生物的实验室培养【课程目标】了解培养基的基础知识，进行微生物培养和无菌技术的操作。【课题重点】无菌技术的操作【课题难点】无菌技术的操作基础知识一、培养基1・概念：人们按照微生物对的不同需求，配制出供其—的营养基质叫培养基。可分为培养基和培养基。2.营养构成：各种培养基一般都含有、、和,此外还要满足微生物生长对、以及的要求。3.培养乳酸杆菌时需在培养基中添加、培养霉菌时需将培养基PH调至、培养细菌时需将PH调至、培养厌氧微生物则需提供条件。K思考从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？【补充1】碳源：如C02、糖类、脂肪酸等有机

2、物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。【补充2】培养基包括哪些营养成分：碳源、氮源、水、无机盐、生长因子等，蔗糖是捉供碳源的，也就是提供能源的，琼脂是凝固剂氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白月东等，主要用來合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、0、N的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。二、无菌技术：阅读“无菌技术”，讨论冋答下列问题：（一0获得纯净培养物的关键是,具体操作如下：1.对实验操作的—、操作者的和进行02.将用于微生物培养的、和等器具进行°3.为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在_附近进行。4.实验操作

3、吋应避免己经灭菌处理的材料用具与相接触。（二）消毒和灭菌1.消毒是指o常用的方法有、,消毒法。2.灭菌是指o常用的方法有：、、灭菌。分别适用于那些用具？K思考2』无菌技术除了防止培养物被污染外，述具有的目的是什么？K思考3』利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？K思考4』物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是;随后关闭排气阀继续加热，气压升至,温度为,并维持;最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至—时打开锅盖，其目的是防止和实验操作一一大肠杆菌的纯化培养:本实验所用的培养基是,本实验可分成

4、两个阶段进行。—•制备牛肉膏蛋白月东固体培养基1制备牛肉膏责门腺固休培养基的操作步骤是:K思考5》在制备牛肉膏蛋白腺固体培养基的称量操作中，动作要迅速，原因是什么？溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么？K思考6》牛肉膏和蛋白豚主要为微生物提供什么等营养物质？2.倒平板：待培养基冷却至°C左右吋在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是：%1在火焰旁右于拿,左手；%1使锥形瓶的瓶口;%1左手将培养皿,右于,立刻盖上皿盖。%1待平板冷却凝固后，将平板°K思考7』锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？K思考8』倒平板的目的是什么？K思考9』若皿盖和皿底Z间粘有培养基

5、，则该平板能否培养微生物？为什么？K思考10》配制斜而培养基作用是什么？，试管为什么要加塞棉塞？二、纯化大肠杆菌微生物接种：最常用的是法和'法。另外还有穿刺接种和斜面接种等。1.平板划线法是的操作，将聚集的菌种逐步鏗分散到培养基的表而。其操作步骤是：①将在酒精灯火焰上灼烧直至,②在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。③将菌种试管口通过火焰达到的目的。④将冷却的接种环伸入到0⑤将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。⑥将皿盖打开-条缝隙，把接种环,盖上皿盖，不要划破培养基。⑦灼烧接种环，冷却后从划线。重复上述过程，完成三、卩q、五区域内划线

6、。注意不要将相连。⑧将平板培养0K思考2坊収菌和谕灼烧接种环的目的星什么？为什么除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环？取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行,其目的是？最后灼烧接种环的目的是在第1次划线后都从上次划线末端开始的目的是？1.稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将进行培养。当稀释倍数足够高时，叩可获得单个细菌形成的标准菌落°系列稀释操作：%1収盛有mL水的无菌试管6支,编号101、102、103、104、105>106=%1用灼烧冷却的移液管吸取—mL菌液注入编号为101试管中，并吹打3次使之混匀。%1从101倍液屮吸取mL菌

7、液注入到编号为102试管内吹打均匀，获得102倍液。依此类推。K思考12』系列稀释操作的注意書项是什么？K思考132涂布平板操作的步骤是什么？结果分析与评价1培养未接种培养基的作用是什么？，若有菌落形成，说明什么？2在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落颜色？形态？3培养12h和24h后的菌落大小二；菌落分命位置？原因？K思考24习在某培养基上出现了3种特征不同的菌落是什么原因？K思考15》频繁使用的菌种利用什么法保存？长期保存菌种的方法是什么？六、课题成果评价（一）培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温1〜2d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的

8、，否则需要重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求如果培养基上生长的菌落的颜色、