密封完好性试验.ppt

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1、轧盖密封完好性试验目录一、概述二、试验准备三、试验步骤四、再验证周期概述一、概述1、试验目的：用微生物侵入试验对冻干粉针剂车间轧盖密封系统进行挑战性试验，以确认轧盖后容器密封系统的完好性。2、试验概述：取西林瓶灌装入已灭菌培养基，在正常生产线上抽真空、压塞、轧盖。此后，将容器密封面浸入高浓度运动性菌液中，取出并检查是否有微生物侵入，以确认容器密封系统的完好性。同时，须做阳性对照试验，确认培养基的促菌生长能力。试验准备二、试验准备批量：1000瓶/批1、洗瓶:清洗西林瓶1100只，经305℃干热灭菌12分钟

2、后送至灌装间备用。2、胶塞处理:清洗胶塞1100只，经121℃湿热灭菌20分钟后备用。3.1预先对配制、灌装系统按照冻干粉针剂无菌操作要求进行清洁、灭菌。3.2按照培养基生产厂商要求，每批按TSB（胰酪胨大豆肉汤培养基）32.3g，加1L注射用水的比例进行配制，加热溶解并标定至4.5L，置于灭菌柜中用纯蒸汽121℃灭菌20min。二、试验准备3、配制培养基:二、试验准备3.3将灭菌后的培养基（TSB配制液）通过未装滤膜及滤芯的过滤系统，在灌装机的数控器上调节好装量（3.5ml）进行灌装半加塞

3、。3.4将灌装半加塞的培养基在百级层流保护下转移至冻干机内抽真空，结束后全压塞、出箱、轧盖。4、制备微生物菌悬液：4.1从铜绿假单胞菌（ATCC9027）的新鲜斜面上取一整环培养物，分别接入含6ml无菌培养基的试管中，在30～35℃下培养18～24h。4.2将每管的培养物分别转入含600ml相同培养基的容器内，于30~35℃下培养18～24h。在培养结束时，能明显见容器内培养基出现浑浊。4.3在微生物侵入试验开始时，所用菌悬液浓度（活菌数）必须达到1×106CFU/ml。二、试验准备试验步骤营养试验微生物

4、侵入试验阳性对照实验微生物侵入试验后营养试验三、试验步骤1.1从1000瓶培养基中取150瓶作为本次试验的试样品。1.2用剪刀轻轻从斜侧面去除至少50瓶试样品的整个铝盖（注意不要破坏其密封口，将去铝盖时不慎损坏容器密封性的所有试样品剔除），另取80瓶带盖试样品，将每一试样品倒转，使培养基与西林瓶内表面及胶塞充分接触，在30～35℃竖立倒置培养14天。1、试验样品的制备:三、试验步骤1.3在培养期内，当试验中发现任何带盖试样品长菌时，则试验无效，须弃去全部试样品，重新从头开始试验。2.1所有试样品培养14天

5、均不长菌时，从上述1.2试样品中随机取20个带盖试样品，每个试样品内接种100CFU铜绿假单胞菌。在30～35℃下培养7天，或培养至所有试样品都呈阳性结果。三、试验步骤2、确认培养基促菌生长能力―营养试验：2.1.1若7天内，所有接种铜绿假单胞菌的试样品中，微生物生长良好，则容器内培养基的促菌生长能力可判为合格。使用革兰染色后，并置于紫外灯下，培养基呈蓝绿色荧光，则确认试样品容器内生长的菌为接入的铜绿假单胞菌，即为阳性。2.1.2若7天内，所有接种铜绿假单胞菌的试样品中，微生物生长条件不好或经鉴别后受

6、其它菌种污染，则试验失败，需重新作营养试验。三、试验步骤3、微生物侵入试验操作步骤:微生物培养及侵入试验应在不影响生产环境的地方（中心化验室阳性室）进行。三、试验步骤3.1将新鲜的铜绿假单胞菌（ATCC9027）的菌悬液倒入适当的容器内，用试管架固定试样品。三、试验步骤3.2从上述1.2试样品中再取50只带盖试样品为A组，另取25个去盖试样品为B组，均倒置于菌悬液中,使试样容器内的培养基充分接触封口内表面，试样品的颈部及封口的外表面应完全浸泡在菌悬液中（如下图1所示）。图1微生物挑战试验示意图三、试验步骤

7、3.3将A组和B组试样品在菌悬液中持续浸泡约4h后，取出试样品，擦干试样品容器外残余的菌悬液，其外表用含0.5%过乙酸的70%异丙醇消毒五分钟（注意不要破坏其密封口）。三、试验步骤3.4从1.2试样品中另取有盖和去盖的培养基各两个，做阳性对照。阳性对照试样品不经菌悬液浸泡，其外表用含0.5%过乙酸的70%异丙醇消毒五分钟后，接种10～100CFU铜绿假单胞菌，按营养试验的步骤进行阳性对照试验。3.5将消毒后的试样品放入塑料袋中，置30～35℃下培养7天。检查试样品内微生物生长情况，有生长记作“﹢”，无生长

8、记作“﹣”。三、试验步骤3.5.1如果试样品长菌，则按照2.1所述方法确认生长菌是挑战微生物――铜绿假单胞菌。3.5.2如果所有试样品均不长菌，则从浸过菌悬液的A组试样中取10甁，B组试样中取5瓶，按2.所述方法对试样品进行营养性试验。三、试验步骤3.6微生物侵入试验用菌悬液经灭菌后丢弃。4.1步骤2、3.4中进行的营养试验和3.5.2中进行的阳性对照试验都合格，微生物侵入试验才有效。三、试验步骤4、结果评价:4.2挑战试验中