可降解PBSLA嵌段共聚物对蚯蚓酶活的影响.pdf

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1、科技创新2017年第1期科技创新与应用可降解PBSLA嵌段共聚物对蚯蚓酶活的影响吴昊（咸阳师范学院，陕西咸阳712000）摘要：采用自然土壤法，研究了可生物降解PBSLA嵌段共聚物对蚯蚓超氧化歧化酶（SOD）和过氧化物酶（POD）两种抗氧化酶活性的影响。结果表明：整个实验过程中，SOD和POD均在一定的时期内受到了刺激作用，但这种刺激都比较小。低分子量共聚物的影响出现较早，高分子量共聚物的对蚯蚓的毒性影响经过一定时间才表现出来，即滞后现象。值得注意的是，实验末期，实验组中蚯蚓酶活的变化与空白组基本处于相同水平。总之，

2、实验过程中蚯蚓未出现明显的死亡现象，该聚合物对蚯蚓是安全的。关键词：聚丁二酸丁二醇酯-聚乳酸；蚯蚓；超氧化歧化酶过氧化物酶；过氧化物酶研究发现由于聚酯中大量酯键的存在，所以很多聚酯能够被微1ml，定容至1.5ml。生物识别而发生微生物降解。其中聚丁二酸丁二醇酯（PBS）是一种1.2.3酶活的测定具有广泛应用前景的可生物降解聚酯。所以研究该聚合物对生态系酶活性测定：SOD活性的测定参考自俊青等（1998）的方法。统的毒性是非常有价值的。POD活性的测定参考吕淑霞等（2003）的方法。研究物质对土壤环境毒性的一种常用的方

3、法是利用蚯蚓进行1.2.4数据统计试验。经过研究学者的努力，通过判断蚯蚓体内酶活的变化来判断利用软件SPSS17.0将所得到的每组蚯蚓酶活数据，进行统计分环境的污染程度已成为也一种标准。蚯蚓体内的抗氧化物酶包括超析。氧化物岐化酶（SOD），过氧化氢酶（CAT）和过氧化物酶（POD）。其中2结果与讨论SOD的作用是能够将机体内的O-转变为HO，而CAT和POD可2.1PBSLA对SOD酶活的影响222以将H2O2分解为氧气和水。关于其它可降解材料对蚯蚓的影响已有研究，然而关于PBSLA嵌段共聚物对蚯蚓体内抗氧化物酶活的

4、影响还没有报道。因此，文章研究了PBSLA嵌段共聚物对蚯蚓体内两种抗氧化物酶活的影响。1试验材料与测试方法1.1试验材料1.1.1试验样品所提供的试验样品为实验室所合成PBSLA嵌段共聚物，分子量分别为5000、20000和30000。1.1.2试验试剂和测试仪器考马斯亮蓝G-250；牛血清蛋白；DNS；葡萄糖。组织粉碎机；人工培养箱。冷冻离心机。UV-2006A型可见紫外分光光度计。凝胶液相色谱仪。1.1.3供试蚯蚓和土壤图1Mn为5.0×103的PBSLA对SOD的影响蚯蚓购于天龙蚯蚓养殖公司，实验前预处理：选择

5、大小均匀（0.3-0.5g），生殖环比较明显的健康成蚓。自然突然实验法：取自咸阳郊区表土（0~20cm厚的地表土），烘干，研磨，过筛（10目，2mm），试验土壤为
土，全氮0.92g·kg-1，全磷
0.82g·kg-1，土壤有机质10.76g·kg-1（有机碳6.48g·kg-1），速效钾289.0mg·kg-1，pH=8.4，碱解氮58.87mg·kg-1，速效磷14.5mg·kg-1。1.2试验步骤根据OECDguidelineNo207标准方法，进行毒性试验研究。1.2.1蚯蚓预培养将直径为15cm的三层滤纸

6、铺在1l的烧杯中，滴加5ml去离子水，充分润湿滤纸，并使得滤纸和烧杯底部无空隙存在。将试验所需蚯蚓放在湿润的滤纸上。（注：蚯蚓数量不宜太多，可分为多个烧杯培养。）然后用滤纸将烧杯口封住，并用竹签对滤纸进行扎孔，最后将烧杯放入人工培养箱中，放置一昼夜。培养箱预设条件：20.5℃，80%～85%的湿度。图2Mn为2.0×104的PBSLA对SOD的影响毒性试验：分别将试验样品（三种分子量的PBSLA共聚物）用粉碎机进行粉碎10分钟，称取定量的粉末样品（0.1%wt，0.5%wt，2.5%wt）与0.3g的试验土壤加到试验

7、容器中进行混合，搅拌均匀后，用喷雾器定量喷洒6ml自来水，控制容器内的湿度在35%左右。取大小均匀的10条蚯蚓于试验容器中进行培养，用定性滤纸封口后，在用竹签进行均匀扎孔。最后试验容器在人工培养箱中进行培养。培养条件：20.5℃，80%～85%的湿度，每隔12个小时进行光照培养。每隔一定时间进行取样，然后进行粉碎，提取，测试蚯蚓体内酶活。试验周期为30天，且每组试验均设置3组平行样进行对照试验。1.2.2酶的提取酶的提取方法：将取出来的每组蚯蚓用自来水进行冲洗后，用滤纸擦干，放入组织粉碎机中，按照一定比例（1mg/m

8、l）加入Tris-HCl缓冲溶液，对蚯蚓进行粉碎，转速为10000rpm的转速，将得到的匀浆液用冷冻离心机进行分离（冷冻离心条件：4℃，15000rpm，15分钟）。取上清液0.5ml，加入0.05mol/lTris-HCl缓冲液（pH为7.8）图3Mn为3.0×104的PBSLA对SOD的影响-97-科技创新与应用2017年第1期科技创新基于