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时间:2020-02-29
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1、科技创新2017年第1期科技创新与应用可降解PBSLA嵌段共聚物对蚯蚓酶活的影响吴昊(咸阳师范学院,陕西咸阳712000)摘要:采用自然土壤法,研究了可生物降解PBSLA嵌段共聚物对蚯蚓超氧化歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)两种抗氧化酶活性的影响。结果表明:整个实验过程中,SOD和POD均在一定的时期内受到了刺激作用,但这种刺激都比较小。低分子量共聚物的影响出现较早,高分子量共聚物的对蚯蚓的毒性影响经过一定时间才表现出来,即滞后现象。值得注意的是,实验末期,实验组中蚯蚓酶活的变化与空白组基本处于相同水平。总之,
2、实验过程中蚯蚓未出现明显的死亡现象,该聚合物对蚯蚓是安全的。关键词:聚丁二酸丁二醇酯-聚乳酸;蚯蚓;超氧化歧化酶过氧化物酶;过氧化物酶研究发现由于聚酯中大量酯键的存在,所以很多聚酯能够被微1ml,定容至1.5ml。生物识别而发生微生物降解。其中聚丁二酸丁二醇酯(PBS)是一种1.2.3酶活的测定具有广泛应用前景的可生物降解聚酯。所以研究该聚合物对生态系酶活性测定:SOD活性的测定参考自俊青等(1998)的方法。统的毒性是非常有价值的。POD活性的测定参考吕淑霞等(2003)的方法。研究物质对土壤环境毒性的一种常用的方
3、法是利用蚯蚓进行1.2.4数据统计试验。经过研究学者的努力,通过判断蚯蚓体内酶活的变化来判断利用软件SPSS17.0将所得到的每组蚯蚓酶活数据,进行统计分环境的污染程度已成为也一种标准。蚯蚓体内的抗氧化物酶包括超析。氧化物岐化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)。其中2结果与讨论SOD的作用是能够将机体内的O-转变为HO,而CAT和POD可2.1PBSLA对SOD酶活的影响222以将H2O2分解为氧气和水。关于其它可降解材料对蚯蚓的影响已有研究,然而关于PBSLA嵌段共聚物对蚯蚓体内抗氧化物酶活的
4、影响还没有报道。因此,文章研究了PBSLA嵌段共聚物对蚯蚓体内两种抗氧化物酶活的影响。1试验材料与测试方法1.1试验材料1.1.1试验样品所提供的试验样品为实验室所合成PBSLA嵌段共聚物,分子量分别为5000、20000和30000。1.1.2试验试剂和测试仪器考马斯亮蓝G-250;牛血清蛋白;DNS;葡萄糖。组织粉碎机;人工培养箱。冷冻离心机。UV-2006A型可见紫外分光光度计。凝胶液相色谱仪。1.1.3供试蚯蚓和土壤图1Mn为5.0×103的PBSLA对SOD的影响蚯蚓购于天龙蚯蚓养殖公司,实验前预处理:选择
5、大小均匀(0.3-0.5g),生殖环比较明显的健康成蚓。自然突然实验法:取自咸阳郊区表土(0~20cm厚的地表土),烘干,研磨,过筛(10目,2mm),试验土壤为土,全氮0.92g·kg-1,全磷0.82g·kg-1,土壤有机质10.76g·kg-1(有机碳6.48g·kg-1),速效钾289.0mg·kg-1,pH=8.4,碱解氮58.87mg·kg-1,速效磷14.5mg·kg-1。1.2试验步骤根据OECDguidelineNo207标准方法,进行毒性试验研究。1.2.1蚯蚓预培养将直径为15cm的三层滤纸
6、铺在1l的烧杯中,滴加5ml去离子水,充分润湿滤纸,并使得滤纸和烧杯底部无空隙存在。将试验所需蚯蚓放在湿润的滤纸上。(注:蚯蚓数量不宜太多,可分为多个烧杯培养。)然后用滤纸将烧杯口封住,并用竹签对滤纸进行扎孔,最后将烧杯放入人工培养箱中,放置一昼夜。培养箱预设条件:20.5℃,80%~85%的湿度。图2Mn为2.0×104的PBSLA对SOD的影响毒性试验:分别将试验样品(三种分子量的PBSLA共聚物)用粉碎机进行粉碎10分钟,称取定量的粉末样品(0.1%wt,0.5%wt,2.5%wt)与0.3g的试验土壤加到试验
7、容器中进行混合,搅拌均匀后,用喷雾器定量喷洒6ml自来水,控制容器内的湿度在35%左右。取大小均匀的10条蚯蚓于试验容器中进行培养,用定性滤纸封口后,在用竹签进行均匀扎孔。最后试验容器在人工培养箱中进行培养。培养条件:20.5℃,80%~85%的湿度,每隔12个小时进行光照培养。每隔一定时间进行取样,然后进行粉碎,提取,测试蚯蚓体内酶活。试验周期为30天,且每组试验均设置3组平行样进行对照试验。1.2.2酶的提取酶的提取方法:将取出来的每组蚯蚓用自来水进行冲洗后,用滤纸擦干,放入组织粉碎机中,按照一定比例(1mg/m
8、l)加入Tris-HCl缓冲溶液,对蚯蚓进行粉碎,转速为10000rpm的转速,将得到的匀浆液用冷冻离心机进行分离(冷冻离心条件:4℃,15000rpm,15分钟)。取上清液0.5ml,加入0.05mol/lTris-HCl缓冲液(pH为7.8)图3Mn为3.0×104的PBSLA对SOD的影响-97-科技创新与应用2017年第1期科技创新基于
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