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1、陈爱红审核人学科生物编写人:备课组鹿邑三高高一生物导学案2015.04.26DNA的粗提取与鉴定学习目标1.尝试对植物或动物组织屮的DNA进行粗提取2.了解DNA的物理化学性质3.理解DNA粗提取以及DNA鉴定的原理学习重点与难点DNA的粗提取和鉴定方法自主学习一基础知识1.提取DNA的方法提取牛物大分子的基本思路是。对于DNA的粗提取年级：长签字:课题：DNA的粗提取与鉴定课时：第一课时本期总课时:17血言，就是要利用DNA与、和等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA,去除其他成分。1)DNA的溶解性DNA和蛋白质等其他成分在不
2、同浓度的屮溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离戸的。课本图5—1是DNA在NaCl溶液屮的溶解度曲线，请根据曲线图，【思考】①在什么浓度下，DNA的溶解度最小？DNA在NaCl溶液屮的溶解度是如何变化的？%1如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液屮溶解或析出？此外，DNA不溶于溶液,但是细胞屮的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步的分离。但是2）DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解对没有影响。大多数蛋白质不能忍受60-80T的高温，而D
3、NA在以上才会变性。洗涤剂能够瓦解，但对DNA没有影响。3）DNA的鉴定在条件下，DNA遇会被染成色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。2.实验设计1）实验材料的选取凡是含有的牛物材料都可以考虑，但是选用的牛物组织，成功的可能性更大。在下面的牛物材料屮选取适合的实验材料：鱼卵、猪肝、菜花（花椰菜）、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、獗猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基的大肠杆菌【思考】哺乳动物的红细胞的特点?2）破碎细胞，获取含DNA的滤液动物细胞的彼碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的,同时用搅拌，过滤后收集滤液
4、即可。如果实验材料是植物细胞，需要先用溶解细胞膜。例如,提取洋葱的DNA时，在切碎的洋葱屮加入一定的和,进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。【思考】①为什么加入蒸镭水能使鸡血细胞破裂？②加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么?%1如果研磨不充分，会对实验结果产牛怎样的影响?%1此步骤获得的滤液屮可能含有哪些细胞成分？3）去除滤液中的杂质4）DNA的析出与鉴定将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积冷却的—,静置,溶液屮会出现,这就是粗提取的DNA。用玻璃棒搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为的
5、NaCl溶液5ml,将丝状物放入其屮一支试管屮，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管屮各加入4ml的_□混合均匀后，将试管置于中加热5min,待试管冷却后,比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变o2.操作提示以血液为实验材料吋，每100ml血液屮需要加入3g,防止O加入洗涤剂后，动作要、,否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤地操作。加入洒精和用玻璃棒搅拌吋，动作要，以免,导致DNA分子不能形成絮状沉淀。二苯胺试剂要,否则会影响鉴定的效果。3.结果分析与评价［疑难点拨］1.DNA的溶解度与NaCl溶液浓度的
6、关系：当NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时，随浓度的升高，DNA的溶解度降低；当NaCl溶液浓度高于0.14mol/L吋，随浓度升高，DNA的溶解度升高。2.制备鸡血细胞液时，要在新鲜的鸡血中加入柠檬酸钠的原因制备鸡血细胞液时，要在新鲜的鸡血屮加入抗凝剂——柠檬酸钠，防止血液凝固。其原理是柠檬酸钠能与血浆屮C屮发牛反应，牛成柠檬酸钙络合物,血浆屮游离的Cf大大减少，血液便不会凝固，因为鸡血红细胞，白细胞都有细胞核，DNA主要存在于细胞核屮，所以在离心或静置沉淀后，要弃出上层清液——血浆。3.提取DNA的第一•步是材料的选取，其
7、FI的是一定要选取DNA含量较高的牛物材料，否则会由于实验过程屮或多或少的损失而造成检测的困难；第二步是DNA的释放和溶解，这一步是实验成功与否的关键，要尽可能使细胞内的DNA全部溶解；第三步是DYA的纯化，即根据DNA的溶解特性、对卿及高温的耐受性的不同等特性，最大限度地将DNA与杂质分开；最后一步是对DNA进行鉴定，这是対整个实验的结果的检测。4.在D7A的析出的步骤屮用到玻璃棒搅拌时，注意动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。5.盛放鸡血细胞液的容器，最好是頼料容器。鸡血细胞破碎以后释放出的DN
8、A,容易被玻璃容器吸附，由于细胞内DA的含量本来就比较少，再被玻璃容器吸附去一部分，提取到的DNA就会更少。因此，实验过程屮最好使用塑料的烧杯和试管，这样可以减少提取过程的DNA的损失。［典例解析］本实验中有三次过滤：⑴过滤用蒸啊水
