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1、陈爱红审核人学科生物编写人:备课组鹿邑三高高一生物导学案2015.04.26DNA的粗提取与鉴定学习目标1.尝试对植物或动物组织屮的DNA进行粗提取2.了解DNA的物理化学性质3.理解DNA粗提取以及DNA鉴定的原理学习重点与难点DNA的粗提取和鉴定方法自主学习一基础知识1.提取DNA的方法提取牛物大分子的基本思路是。对于DNA的粗提取年级:长签字:课题:DNA的粗提取与鉴定课时:第一课时本期总课时:17血言,就是要利用DNA与、和等在物理和化学性质方面的差异,提取DNA,去除其他成分。1)DNA的溶解性DNA和蛋白质等其他成分在不
2、同浓度的屮溶解度不同,利用这一特点,选择适当的盐浓度就能使充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反,以达到分离戸的。课本图5—1是DNA在NaCl溶液屮的溶解度曲线,请根据曲线图,【思考】①在什么浓度下,DNA的溶解度最小?DNA在NaCl溶液屮的溶解度是如何变化的?%1如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液屮溶解或析出?此外,DNA不溶于溶液,但是细胞屮的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理,可以将DNA与蛋白质进一步的分离。但是2)DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解对没有影响。大多数蛋白质不能忍受60-80T的高温,而D
3、NA在以上才会变性。洗涤剂能够瓦解,但对DNA没有影响。3)DNA的鉴定在条件下,DNA遇会被染成色,因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。2.实验设计1)实验材料的选取凡是含有的牛物材料都可以考虑,但是选用的牛物组织,成功的可能性更大。在下面的牛物材料屮选取适合的实验材料:鱼卵、猪肝、菜花(花椰菜)、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、獗猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基的大肠杆菌【思考】哺乳动物的红细胞的特点?2)破碎细胞,获取含DNA的滤液动物细胞的彼碎比较容易,以鸡血细胞为例,在鸡血细胞液中加入一定量的,同时用搅拌,过滤后收集滤液
4、即可。如果实验材料是植物细胞,需要先用溶解细胞膜。例如,提取洋葱的DNA时,在切碎的洋葱屮加入一定的和,进行充分的搅拌和研磨,过滤后收集研磨液。【思考】①为什么加入蒸镭水能使鸡血细胞破裂?②加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么?%1如果研磨不充分,会对实验结果产牛怎样的影响?%1此步骤获得的滤液屮可能含有哪些细胞成分?3)去除滤液中的杂质4)DNA的析出与鉴定将处理后的溶液过滤,加入与滤液体积冷却的—,静置,溶液屮会出现,这就是粗提取的DNA。用玻璃棒搅拌,卷起丝状物,并用滤纸吸取上面的水分。取两支20ml的试管,各加入物质的量浓度为的
5、NaCl溶液5ml,将丝状物放入其屮一支试管屮,用玻璃棒搅拌,使丝状物溶解。然后,向两支试管屮各加入4ml的_□混合均匀后,将试管置于中加热5min,待试管冷却后,比较两支试管溶液颜色的变化,看看溶解有DNA的溶液是否变o2.操作提示以血液为实验材料吋,每100ml血液屮需要加入3g,防止O加入洗涤剂后,动作要、,否则容易产生大量的泡沫,不利于后续步骤地操作。加入洒精和用玻璃棒搅拌吋,动作要,以免,导致DNA分子不能形成絮状沉淀。二苯胺试剂要,否则会影响鉴定的效果。3.结果分析与评价[疑难点拨]1.DNA的溶解度与NaCl溶液浓度的
6、关系:当NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时,随浓度的升高,DNA的溶解度降低;当NaCl溶液浓度高于0.14mol/L吋,随浓度升高,DNA的溶解度升高。2.制备鸡血细胞液时,要在新鲜的鸡血中加入柠檬酸钠的原因制备鸡血细胞液时,要在新鲜的鸡血屮加入抗凝剂——柠檬酸钠,防止血液凝固。其原理是柠檬酸钠能与血浆屮C屮发牛反应,牛成柠檬酸钙络合物,血浆屮游离的Cf大大减少,血液便不会凝固,因为鸡血红细胞,白细胞都有细胞核,DNA主要存在于细胞核屮,所以在离心或静置沉淀后,要弃出上层清液——血浆。3.提取DNA的第一•步是材料的选取,其
7、FI的是一定要选取DNA含量较高的牛物材料,否则会由于实验过程屮或多或少的损失而造成检测的困难;第二步是DNA的释放和溶解,这一步是实验成功与否的关键,要尽可能使细胞内的DNA全部溶解;第三步是DYA的纯化,即根据DNA的溶解特性、对卿及高温的耐受性的不同等特性,最大限度地将DNA与杂质分开;最后一步是对DNA进行鉴定,这是対整个实验的结果的检测。4.在D7A的析出的步骤屮用到玻璃棒搅拌时,注意动作要轻缓,以免加剧DNA分子的断裂,导致DNA分子不能形成絮状沉淀。5.盛放鸡血细胞液的容器,最好是頼料容器。鸡血细胞破碎以后释放出的DN
8、A,容易被玻璃容器吸附,由于细胞内DA的含量本来就比较少,再被玻璃容器吸附去一部分,提取到的DNA就会更少。因此,实验过程屮最好使用塑料的烧杯和试管,这样可以减少提取过程的DNA的损失。[典例解析]本实验中有三次过滤:⑴过滤用蒸啊水