DNA的粗提取与鉴定(学案)

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1、高二年级生物科导学案学案类型：新授课导学案材料序号：编稿教师：审稿教师：5.1DNA的粗提取与鉴定【学习目标】（一）知识目标知识与技能:1、通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取，了解DNA的物理化学性质。2、理解DNA粗提取与鉴定的原理过程与方法:掌握DNA如提取计数，能利用DNA的性质进行实验设计和操作情感态度与价值观:通过对DNA的粗提取的实验过程的设计及操作，锻炼科学的思维方法，培养实事求是的科学态度。（二）重点和难点：重点:DNA的粗提取和鉴定方法难点:DNA的粗提取和鉴定方法【课前预习】(一)实验原理：1．提取DNA的方法提取生物大分子的基本思路是。对于DNA

2、的粗提取而言，就是要利用、等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。1）DNA的溶解性DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。2）DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解，但是对没有影响。大多数蛋白质不能忍受60—80oC的高温，而DNA在以上才会变性。洗涤剂能够瓦解，但对DNA没有影响。3）DNA不溶于，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。2.DNA的鉴定：DNA遇（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定

3、DNA的试剂。（二）实验设计1、实验材料的选取凡是含有的生物材料都可以考虑，但是使用的生物组织，成功的可能性更大。2、破碎细胞，获取含DNA的滤液1）制备和提取细胞核物质：动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例。在鸡血细胞液中加入一定量的，同时用搅拌，得到鸡血细胞液。过滤后收集研磨液；如果实验材料是植物细胞，需要先用溶解细胞膜。例如，提取洋葱的DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的和食盐，进行充分的搅拌和研磨。过滤后收集研磨液。思考：①为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？②加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？③如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响?④此步骤获得的滤液中可能含有哪些

4、细胞成分？2）溶解细胞核的DNA：向收集的滤液中加入的溶液，搅拌使DNA呈溶解状态。3、去除滤液中的杂质方案一的原理是DNA在不同浓度溶液中溶解度不同；方案二的原理是蛋白酶分解，但不分解；方案三的原理是和的变性温度不同。思考：①为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？②方案二与方案三的原理有什么不同？4、DNA的析出与鉴定将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积、冷却的，静置，溶液中会出现，这就是粗提取的DNA。用玻璃棒搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为的NaCl溶液5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。

5、然后，向两支试管中各加入4ml的。混合均匀后，将试管置于中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变。【课内探究】以鸡血细胞DNA的提取和鉴定为例1．制备鸡血细胞液：在鸡血中加入质量浓度为0．1g/mL的柠檬酸钠溶液，离心处理；2．提取鸡血细胞的细胞核物质：向鸡血细胞液中加入蒸馏水，搅拌、过滤；讨论1：加入蒸馏水的目的是什么？为什么能达到此目的？3．溶解细胞核内的DNA：加入2mol/L的氯化钠溶液，搅拌，使DNA呈溶解状态；4．析出含DNA的黏稠物：加入蒸馏水，用玻璃棒搅拌；讨论2：此时加入蒸馏水的目的是什么？5．滤取含DNA的黏稠物

6、：过滤；讨论3：这次过滤与上次过滤的目的一样吗？为什么？6．将DNA的黏稠物再溶解：加入2mol/L的氯化钠溶液，搅拌，使DNA呈溶解状态；7．过滤含有DNA的氯化钠溶液：过滤；讨论4：这一步骤的目的是什么？讨论5：为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？8．提取含杂质较少的DNA：加入冷却的95%的酒精，搅拌；讨论6：这一步骤的目的是什么？3讨论7：为什么加入的酒精需要冷却的？讨论8：本实验中有三次过滤：⑴过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液⑵过滤含粘稠物的0.14mol/LNaCl溶液⑶过滤溶解有DNA的2mol/LNaCl溶液以上三次过滤分别为了获得（）A含核物质的滤液、纱

7、布上的粘稠物、含DNA的滤液B含核物质的滤液、滤液中DNA粘稠物、含DNA的滤液C含核物质的滤液、滤液中DNA粘稠物、纱布上的DNAD含较纯的DNA滤液、纱布上的粘稠物、含DNA的滤液【突破训练】1．下列图示中能反映DNA溶解度与NaCl溶液浓度之间关系的是（）2．在DNA的粗提取和鉴定的实验中，提取鸡血细胞的核物质和析出含DNA的粘稠物的操作过程中均用到蒸馏水，其作用在于（）A．前者用来溶解血细胞，后者用来溶解DNAB．前者使血细胞吸水破裂，后者用来稀释NaCl溶液C．前者用来分离细胞核与